首先，在 Poly-D-赖氨酸包被的 96 孔板中对环转染的 HEK293 T 细胞进行种子拆分。接下来，在 1.7 毫升微量离心机中制备 Rhosin、Ehop-016 和 ZCL278 的三种新鲜溶液。加入用于海肾荧光素酶的活细胞底物，稀释 1 至 2， 000，至每种溶液的终浓度为 30 毫摩尔。要制备 0.55 和 50 微摩尔的 ZCL278 溶液，请在培养基中使用初始 50 微摩尔的 ZCL278 进行连续稀释。
然后从含有转染细胞的 96 孔板的每个孔中取出培养基。向每个孔中加入 50 微升化学和底物培养基混合物。将细胞孵育 1 小时、2 小时或 5 小时后，将板加载到化学发光读板器上并测量发光。
确保在开始之前打开读板器。访问 Microplate Reader 软件并单击 New session 创建新文件。单击培养箱，将读板器的温度设置为 37 摄氏度。
检查温度选项并键入 37 摄氏度。在 plate layout（板布局）下，选择选项 unknown（未知），然后单击并拖动孔以指定要测量的孔。然后转到协议，单击发光，并保持默认设置。
设置完成后，将带盖的板装入读板器，然后选择 run plate in（运行板）。单击 start （开始），将出现一个 Save file （保存文件） 窗口。重命名文件，然后单击 Save （保存）。
读数完成后，从酶标仪中取出酶标板，然后单击 run plate in（运行板）选项以将酶标仪放回原处。完成后，将板放回加湿培养箱中，直到下一次读数。在处理的 1 小时、2 小时和 5 小时时，与对照 DMSO 处理的细胞相比，Rhosin 处理的细胞荧光素酶活性没有显着变化。
Rac GTP 酶抑制剂 EHop-016 的荧光素酶活性显著低于 DMSO。ZCL278 处理的细胞在所有三个时间点的荧光素酶活性均显著低于对照 DMSO。在治疗后 1 、 2 和 5 小时测量的荧光素酶活性显示剂量依赖性反应。
与对照 DMSO 相比，较高浓度的 ZCL278 仍显示出显着变化。
