首先，从注射逍遥丸的安乐死小鼠中制备蜡块。将蜡块切成 6 微米厚的连续段，然后在 70 至 72 摄氏度下烘烤 30 至 60 分钟。将切片转移到脱蜡溶液中 8 分钟，然后在 75% 无水乙醇中脱水两次，每次脱水 5 分钟，然后在 PBS 中冲洗 5 分钟。
现在进行 EDTA 高压修复 15 分钟。用 PBS 冲洗后，向组织中滴加 3% 过氧化氢并孵育 10 分钟。用 PBS 洗涤组织 3 次，每次 5 分钟。
使用免疫组织化学笔，在组织周围画一个圆圈。用 PBS 洗涤组织后，在一抗溶液中染色过夜。第二天，用 PBS 冲洗组织 3 次，每次 5 分钟。
滴加二抗并孵育 60 分钟。用 PBS 冲洗后，将组织在 DAB 即用型溶液中孵育 3 到 5 分钟。现在用苏木精对组织染色 3 分钟。
同样，用 PBS 冲洗组织，然后将其放入分化溶液中 10 秒。PBS 冲洗后，加入回流溶液 10 秒钟。最后，进行 75% 无水乙醇处理 5 分钟，并用中性树脂密封玻片。
苏木精-伊红染色显示假小鼠小梁排列紧密，而 OVX 小鼠表现出典型的骨质疏松性改变，小梁稀疏，骨髓腔增大。显微 CT 比较显示，与假小鼠相比，OVX 小鼠的小梁网不完整和骨皮质变薄。药物干预后，与 OVX 组相比，苏木精-伊红染色显示小梁结构恢复，骨髓腔缩小。
影像学指标显示，与 OVX 组相比，大剂量小药丸组骨折小梁较少，网状恢复。免疫组化结果显示药物组碱性磷酸酶和 1 型胶原增加，白细胞介素 17 、 ACT1 和白细胞介素 6 减少。
