基于吸光度的微孔板分析检测人腺苷脱氨酶 1 的血清稳定性

首先，准备血清和酶混合物以及它们各自的对照。在酶标仪中，设置动力学读取方案，以最短读取间隔 30 分钟测量 260 纳米处的吸光度。接下来，在冰上解冻所有冷冻样品，并在 LoBind 微量离心管中用预热至 37 摄氏度的 1x PBS 将每个解冻的样品稀释 1 至 10 个。

要制备 5 毫摩尔腺苷原液，请将 66.8 毫克腺苷添加到 50 毫升 1x PBS 中。将其稀释成 250 微摩尔溶液后，在培养箱中将腺苷预热至 37 摄氏度。向 96 孔紫外线兼容微孔板中，加入 160 μL 腺苷，然后加入 40 μL 每个稀释的蛋白质样品，一式三份。

在 260 摄氏度下测量每个孔在 37 纳米处 30 分钟的吸光度。对于数据分析，将数据导出到电子表格中，然后确定吸光度数据线性区域的斜率作为前几分钟的时间函数。分别从酶加血清混合物和酶加 PBS 混合物的斜率中减去由混合人血清或 PBS 组成的阴性对照的斜率。

最后，将所有调整后的斜率归一化为零小时时间点的原始斜率，以使用方程获得剩余活动的分数，并绘制剩余活动的分数与时间的关系。与 1x PBS 相比，野生型 HsADA1 活性在混合人血清中下降得更快，持续 5 天。与第 5 天相比，野生型 HsADA1 的吸光度下降曲线显示第 0 天的初始斜率更陡峭。

与酶样品相比，阴性对照样品的吸光度变化可以忽略不计。