用于化学毒性试验的猪角膜器官培养和上皮伤口愈合

首先，将猪眼放入 1 升烧杯中。用镊子握住眼球，用剪刀在无菌培养皿中去除多余的眼组织。对于上皮损伤，使用消毒的无绒湿巾握住眼球，并用 6 毫米的环钻标记角膜中心。

然后使用小手术刀或带角钝的软剃须刀片，轻轻刮擦环钻标记圆圈内的上皮细胞。清除所有细胞碎片，同时确保基底膜保持完整。之后，用棉签清洁伤口区域。

使用手术刀和剪刀，沿着角膜-巩膜边缘切割来解剖眼球。然后在含有 PBS 的无菌 500 毫升烧杯中冲洗角膜。接下来，将切除的角膜倒置放入无菌模具中。

用最低必需培养基或 MEM 填充角膜腔，其中含有 1% 琼脂糖，保持在 48 摄氏度。现在，将角膜倒置并转移到 35 毫米的培养皿中。将 2 毫升 MEM（含或不含检测剂）滴加到中央角膜表面，确保覆盖角膜缘结膜区域，同时让上皮暴露在空气中。

然后将培养皿放入 37 摄氏度的加湿 5% 二氧化碳培养箱中。伤口后 40 小时，用 Richardson 染色液对受伤的培养角膜进行染色。在拍摄之前，用 PBS 清洗染色的角膜。

然后用相同大小的环钻标记原来的伤口，用小手术刀刮擦标记圆圈内的上皮细胞。取出收集的细胞并将其转移到预冷的离心管中。与用 0.09% 溴芬酸处理的角膜相比，用 0.1% 奈帕芬酸处理的角膜的剩余伤口面积显著更大，用 0.2 和 0.5 μg/mL 的 LL-37 处理的角膜在高葡萄糖条件下表现出显著加速的伤口愈合与未处理的角膜相比。