首先，将金属网切成 25 x 8 毫米的条带。将定制的网片放入灭菌容器中并高压灭菌 2 小时。高压灭菌后，将灭菌容器和 1.8 毫升小瓶置于层流工作台下。
打开灭菌容器并取下金属网格。将网格装入 1.8 mL 样品瓶的瓶盖中，然后关闭样品瓶。收集人体卵巢皮层组织后，去除髓质并将组织切割成所需的形状。
将 5 毫升玻璃化溶液 1 加入 6 孔板的第一个孔中。使用细胞过滤器，在板的 1 孔中平衡卵巢皮层组织 5 分钟。将细胞过滤器和皮质组织移至含有 5 mL 玻璃化溶液 2 的孔 2 中，并平衡 5 分钟。
然后，将含有皮质组织的过滤器放入含有 5 毫升玻璃化溶液 3 的六孔板的 3 孔中，放置 6 分钟。用灭菌液氮填充准备好的冷冻瓶，然后将其放入装满液氮的冷冻杜瓦瓶中。在一分钟内将组织样品加载到玻璃化装置的金属网格上。
然后将金属网格插入基于网格的冷冻瓶中的液氮中。将 6 mL 平衡溶液加入无菌 6 孔板的 1 孔中，然后将 6 mL RS 转移到 2 孔和 3 孔中。在室温下孵育 1 小时。
将无菌样品杯中的快速加热溶液在 37 摄氏度的加热板上加热 1 小时。在层流工作台下，打开含有玻璃化卵巢皮质组织的冷冻保存小瓶。将网片快速转移到快速升温溶液中。
使用无菌镊子将组织转移到平衡溶液中，并在摇床上孵育 3 分钟。然后，在室温下用 RS1 和 RS2 在摇床上冲洗组织 10 分钟。将钙黄绿素溶解在 100 微升 DMSO 中。
将 3 微升钙黄绿素转移到 1.5 毫升试管的底部，并在零下 20 摄氏度下储存。在 1.5 毫升试管中加入 0.007 克胶原酶，并将试管存放在零下 20 摄氏度。将 997 微升 DPBS 添加到冷冻的 3 微升钙黄绿素中，然后重新悬浮以溶解钙黄绿素。
然后加入冷胶原酶粉，得到 1000 微升的工作溶液。然后加入 500 微升工作钙黄绿素溶液，将两片 2 毫米的卵巢皮质碎片转移到四孔培养皿的孔中。然后在 37 摄氏度下避光孵育 90 分钟。
最后，在荧光显微镜下，确定滤泡活力。
