冻干逆转录酶-重组酶聚合酶扩增 （RT-RPA） 反应的制备

首先，将三甘氨酸溶液在 60 摄氏度下孵育。从冰箱中取出三个 RPA 颗粒条管。在实验室工作台上轻轻敲击试管以去除白色颗粒。

将所有三个沉淀转移到 1.5 mL 微量离心管中 A.移液 25 μL 无核酸酶水，以冲洗联管中残留的 RPA 粉末。将冲洗液转移到新的 1.5 毫升微量离心管中 B.然后，将 10 微升 0.57 摩尔三甘氨酸溶液和 10 微升引物混合物添加到预混管中 B.涡旋并旋转试管后，将其置于冰上。接下来，将 28.4 微升的 5 倍 RPA 缓冲液添加到预混管中 B.通过强烈敲击或多次摇晃彻底混合。

将试管 A 中收集的沉淀转移到预混管 B 中，倒置试管或用手指轻敲试管底部数次以混合。观察溶液是否呈均匀性和单相性。将试管放在冰上。

然后向预混管中加入 0.71 μL 逆转录酶和 2.84 μL RNase H。轻轻地上下敲击或倒置预混液管多次。在将管子放在冰上之前，请短暂地旋转管子。

现在，将 8.4 μL 预混液分装到 10 个预冷的 1.5 mL 试管中，然后将试管置于冰上。分装后，将试管放入浸没在液氮中的金属架中，以准备冻干。在冷冻干燥机上，检查收集器和架子温度。

现在，用一张清洁白纸盖住金属架上打开的试管。将金属架和打开的管子一起放入冷冻干燥机搁板中，然后关闭搁板门。然后，选择所需的程序并按 Start 开始.

二次干燥步骤 30 分钟后，按下停止键。打开真空释放阀释放压力。从架子上取下试管架后，立即盖上试管。