首先，用涂层溶液包被 24 孔板，并在 37 摄氏度下孵育 2 小时，或在室温下过夜。用无菌水清洗板两次，并在室温下储存，直到细胞准备好进行电镀。现在取一段马空肠，将其放入冰上的冷振铃溶液中。
从空肠中取出 10 厘米的部分，在抗肠系膜边界打开，将非淋巴区域置于中心。然后将该部分修剪成大约 7 x 7 厘米的切片，并在解剖前用新鲜的林格溶液充分冲洗组织。现在将组织固定在冷振铃溶液 （PBS） 中涂有有机硅弹性体的培养皿上，粘膜面朝上，同时尽可能拉伸。
使用弯曲的镊子去除肠绒毛，然后从大约 5 x 5 厘米的非淋巴区域去除固有层。接下来，用显微解剖剪刀，从一个角释放粘膜下层，将其去除一张。观察自然分离，同时从内环状肌肉层剥离粘膜下层。
然后将收集的粘膜下层切成 2 到 5 毫米的小块。将它们放入 50 毫升锥形管中，其中含有 5 毫升不含 FBS、胶原酶、蛋白酶和 BSA 的 orgono。将组织在 37 摄氏度下孵育 2 到 3 小时以进行酶消化。
孵育后，加入 10 毫升含 FBS 的室温 orgono 以停止酶的作用。使用 10 毫升血清移液管上下移液组织混合物 15 次，以将细胞与组织分离。然后在室温下以 3000 G 离心混合物 3 分钟。
然后，弃去上清液，用 10 毫升血清移液管上下吹打溶液 15 次，将沉淀重悬于 10 毫升室温 PBS 中。在室温下以 3000 G 离心锥形管 3 分钟。弃去上清液后，通过上下吹打 15 次，将沉淀重悬于 10 毫升含 FBS 的室温 orgono 中。
接下来，通过 100 微米、70 微米和 40 微米孔径的细胞过滤器依次过滤细胞。离心细胞并丢弃上清液后，将沉淀重悬于含 FBS 的 1 毫升 orgono 中。然后用台盼蓝对细胞进行染色以识别活细胞并使用血细胞计数器对其进行计数。
现在在 24 孔板的每个孔中接种大约 400， 000 个细胞在 300 微升含有 FBS 的 orgono 中。向每个孔中加入 5 微升 N2、5 微升 G5 和 10 微升 B27。将板放入 37 摄氏度、含 5% 二氧化碳的培养箱中，以允许细胞粘附。
当第一次传代的细胞达到 70% 至 80% 汇合时，将孔暴露于 0 ng、10 和 25 ng 白细胞介素-1 β 中 24 小时。在培养物中观察到与肠道神经胶质细胞形态一致的梭形细胞，具有多形性，并且来自其他细胞类型的污染最小。
