拟南芥幼苗的热应激处理和用于多核糖体分析和 RNA 提取的蔗糖梯度制备

首先，使用滴管，将每组条件的250个拟南芥种子放在滤纸上，置于不含蔗糖的Murashige和Skoog Basal Media琼脂平板上，补充有1.2%植物琼脂。用铝箔包裹板以阻挡光线，并将其置于 4 摄氏度的培养箱中两天以诱导春化。两天后，打开箔纸，将春化的种子转移到生长室中。

让植物生长五天。接下来，用防水胶带密封装有 5 天龄幼苗的板。将板置于 40 摄氏度的水浴中 1 小时以进行热应激处理。

热处理后，立即冷却板并将其转移到设置为 22 摄氏度的生长室中 2 小时以允许恢复。将 250 株经过热处理或未处理的幼苗收获到 1.5 毫升微量离心管中。立即将收集的样品用液氮冷冻。

制备浓度为 12.5%、24.4%、36.3%、48.1% 和 60% 的蔗糖梯度溶液要制备不连续的蔗糖密度梯度，首先在管底部加载 2.2 毫升 60% 蔗糖溶液。然后，将试管放入 80 摄氏度的冰箱中，将蔗糖溶液冷冻至固态。凝固后，从下到上依次加载 2.2 毫升其他蔗糖浓度。

将准备好的蔗糖梯度储存在 80 摄氏度直至使用。