Translationseffizienztest mit Polysomenprofilen unter Hitzebelastung

Unsere Forschung untersucht die translationale Regulation bei Hitzestress in Pflanzen. Durch die Analyse von nicht-polysomengebundener und polysomengebundener RNA wollen wir untersuchen, wie Pflanzen die Stresstoleranz durch translationale Kontrolle regulieren. Daher stellen wir hier ein Polysomen-Profiling- und Polysomen-RNA-Isolationsprotokoll zur Verfügung, um die Translationseffizienz in Arabidopsis unter Hitzestress zu untersuchen.

In diesem Protokoll stellen wir umfassende und standardisierte Methoden zur Berechnung der Translationseffizienz mittels Spike-in-Normalisierung zur Verfügung, die für eine tiefergehende translatomare Analyse unerlässlich ist. Unser Protokoll bietet eine einfachere und effizientere Methode zur Isolierung von Polysomen-RNA, indem ein kleineres Volumen an organischem Puffer verwendet wird, während eine höhere RNA-Ausbeute erzielt wird.