首先,取 100 毫克新鲜组织或 20 毫克风干组织,并将其放入 2 毫升离心管中。将两个 5 毫米的不锈钢珠子放入离心管中,并将其转移到以 60 赫兹频率运行的高通量组织研磨仪中 60 秒。对于 DNA 提取,向样品中加入 800 μL 预冷的细胞核分离缓冲液,并将其置于涡旋混合器上 5 分钟。
然后,将样品放入离心机中,以 13, 780 g 离心 10 分钟。离心后,小心去除上清液。接下来,向样品中加入 600 μL 缓冲液 P1,然后加入 5 μL RNase A。
涡旋后,将样品在 65 摄氏度的水浴中孵育 1.5 小时,在孵育过程中将试管倒置 2 至 3 次。然后,加入 200 微升缓冲液 P2。充分混合。并将样品置于冰上 15 分钟。
然后,以 13, 780 g 离心 10 分钟。小心地将上清液吸到过滤柱 AF 上,并以 13, 780 g 离心 2 分钟。将下层滤液转移到新的 1.5 mL 离心管中。
计算出滤液体积后,向样品中加入 1.5 倍体积的缓冲液 P3 并立即摇动以混合样品。将 650 μL 制备的混合物加入吸收柱中,孵育 5 分钟。然后,以 13, 780 g 离心 30 至 60 秒。
将所得滤液再次加入吸收塔中。离心并丢弃废液。用 600 μL 冲洗液 WB 洗涤色谱柱两次。离心后,弃去废液,然后将吸收柱放入空收集管中。
将样品以 13, 780 g 离心 2 分钟后,在室温下放置以蒸发残留乙醇。将吸收柱转移到干净的 1.5 mL离心管中,并向吸附膜中心加入 45 μL 预热至 65 摄氏度的无菌去离子水。5 分钟后,将试管在 13, 780 g 下在室温下离心 2 分钟。
然后,使用分光光度计。测定过滤溶液中的 DNA 浓度。OD260 与 OD280 的吸光度比在 1.8 到 1.84 之间,DNA 量超过 100 ng/μL,证实了提取的 DNA 质量良好。