使用 HPLC 分析同时检测小鼠组织中的维甲酸以研究视紫红质和维生素 A 途径

首先，将提取的小鼠组织放入含有 50% 冰冷盐水和 50% 甲醇的组织研磨管中。将研杵插入研磨管中，轻轻旋转五次以使组织匀浆。立即将匀浆组织转移到 15 毫升的试管中。

向均质化的样品中加入 2 毫升甲醇和 1 毫升 0.1 摩尔羟胺。让混合物在室温下静置 15 分钟。对于类维生素 A 提取，向匀浆中加入 10 毫升己烷，并在试管中水平涡旋至少 10 秒。

将匀浆己烷混合物以 1000 x g 离心 3 分钟以分离各相。使用移液器将己烷层转移到单独的 15 mL 玻璃管中，然后将样品放入真空离心机中，以完全蒸发提取样品中的己烷。将干燥的类视黄醇重悬于 15 毫升试管中，加入 100 微升己烷，并充分涡旋以确保所有类视黄醇均溶解。

将整个 100 微升己烷移液到第二个玻璃管中，并涡旋管以溶解类视黄醇。然后将整个 100 μL 己烷移液到单个玻璃惰性容器中进行 HPLC 分析。使用适当的条件设置 HPLC 运行。

根据标准品，使用保留时间和 UV 谱图鉴定每种目标类维生素 A 的峰。使用色谱数据系统，对鉴定出的峰进行积分，并参考外部标准曲线以定量分析物。对于生物组织色谱图，手动积分峰以解决保留时间的变化。

在对照小鼠眼的色谱图中，鉴定出 13-顺式-视黄醛、11-顺式-视黄醛、全反式视黄醇、11-顺式视黄醇和全反式视黄醇。在用羟胺处理的小鼠眼的色谱图中，保留时间增加。这些视黄醛的 Syn 和抗异构体也存在。

在小鼠肝组织色谱图中，棕榈酸视黄酯和全反式视黄醇被鉴定为维生素 A 的主要形式，在小鼠血液中表现出反式视黄醇峰值。UV 吸收光谱证实了色谱图峰中存在类视黄醇亚型。