小鼠宫内移植中静脉和羊膜内植入的研究

该方法有助于回答胚胎学、基因治疗和干细胞移植等关键问题。这项技术的一个优点是，它能够分析不同实验疗法对穆林胎儿的影响。演示这个程序将是医生尼古拉斯安，和芭芭拉库恩斯，医生和研究员在我们的实验室。

在开始手术之前，将5至10微升无菌PBS放入和从手术针头尖端中放入和退出，两到三次清除任何可能的碎屑。接下来，在适当的实验体积和浓度下用感兴趣的试剂填充针头。并在微型喷油器上三次按下模式按钮，前进到喷射校准屏幕。

添加 10 或 100 毫秒的间隔以调整喷射时间，然后再按两次模式按钮。按下平衡按钮并按下脚踏板一次。然后再次踩下踏板，评估每推一次从针头中清空的溶液量。

当微型喷油器校准到适当的实验体积时，将针头填充到正确的注射水平。当所有的针头都洗干净后，确认对怀孕两到六个月大的雌性小鼠的"双眼捏"缺乏反应。剃须腹部，注意不要损坏奶嘴，将动物转移到处于上部位置的加热垫上。

将软膏涂抹在动物的眼睛上，用胶带将四肢固定到加热垫上。对裸露的皮肤进行消毒。然后注射局部麻醉剂，如100微升0.25%的布皮瓦卡因皮。

接下来，做一到两厘米的皮肤切口，使下边界不接近一厘米的内向，并确定筋膜的中线，注意不要伤害周围的胃膜。使用Adson钳子，捏筋膜，而不抓住任何基础器官或胎儿，并打开组织用剪刀。一旦安全地进入腹腔内，将筋膜切口扩展到皮肤切口的长度，并使用棉尖施用器将肠道移动到腹部的上部，以暴露腹膜。

通过切口提取子宫，仔细识别左右卵巢，以确保所有胎儿都计数。将左子宫放回腹部，以便只露出右子宫，保持非注射胎儿温暖。轻轻地抓住非占统治地位的手拇指和食指之间最横向的羊水囊。

将解剖显微镜放在动物上，并调整焦点和照明，以根据需要更好地对胎儿进行可视化。对于静脉注射旋转子宫，使葡萄球菌虚荣，要注射平行于针尖。并且把针放在子宫上，以五度角刺穿子宫壁。

子宫壁和羊水囊之间的尖端，将尖端直接放在葡萄线上虚荣，以几乎切线的角度，将针头滑过虚荣，直到斜面进入容器。必须保持低角，使针头不会穿透容器的后壁。当在针头上观察到血点时，踩脚踏板将感兴趣的材料的全部体积注入容器中。

对于羊膜注射，旋转羊水囊，直到找到没有容器的位置。指向针垂直于子宫壁，刺穿针通过子宫蛋黄囊，羊膜囊注意不穿透任何胎儿组织。然后注入所需的适当体积的材料。

在任一类型的注射后，在提供所需的体积后，从注射部位中取取针头。继续下一个胎儿，直到右子宫角的所有胎儿都注射。然后将右子宫角返回腹部。

将左子宫角从腹部取出。当左角的所有胎儿都注射后，将整个子宫返回到腹部，注意避免子宫或肠道狼。使用一次性转移移液器将约两毫升无菌 PBS 分配到腹部，以替换任何不易察觉的损失。

并使用4-0多糖蛋白910缝合关闭筋膜和腹部在一个连续层。然后将鼠标转移到热灯下的清洁笼中，进行监控，直到完全保持状态。在这项训练实验中，受训者接受子宫内移植的胎儿的肝脏在注射24小时后显示荧光水平较低，因为移植的GP细胞的移植率低于有经验的讲师注射的肝脏。

GFP正供体细胞的流动细胞测量分析也与荧光显微镜下观察到的较低水平荧光素相关。通过羊水内部途径传递的病毒载体的能力，可传感器细胞与羊水接触。上皮细胞在妊娠日12.5胎儿携带GGFP转基因的腺病毒子宫注射48小时后转导就是例证。

一旦掌握了这项技术，每只怀孕的老鼠可以在15-25分钟内完成。看完这个视频后，你应该有一个很好的理解，如何安全和有效地提供不同的治疗小鼠胎儿。