一种自动测定果蝇在空间和时间温度变化中的性能的方法

这种方法可以帮助我们回答关于苍蝇对温度变化的反应的关键问题，例如基因型之间的差异、与其他感官提示的相互作用，或者不同温度受体的功能。该技术的主要优点是，它允许以自动化的方式进行多个快速、精确的温度变化，控制时间和空间。首先将20只雄蝇和20只雌蝇放入含有45毫升飞食介质的饲养瓶中，并将瓶子放入12小时光、12小时黑暗周期的25摄氏度培养箱内。

10天后，在二氧化碳垫上麻醉新近的苍蝇最多4分钟。并使用画笔收集处女苍蝇在2.5由9.5厘米飞饲养小瓶含有6.5毫升新鲜苍蝇食物介质，按性别分成每瓶20只苍蝇组。然后将小瓶返回孵化器五至七天。

要设置温度控制竞技场，请打开竞技场并在控制计算机中打开温度阶段脚本。验证温度序列是否正确设置，并检查每个实验阶段的持续时间是否设置为 60 秒。在起始实验块部分下，确认这些设置：所需的相位数、指示性红色发光二极管的迭代开/关设置、每个相位温度升高 2 摄氏度和起始温度 16 摄氏度。

接下来，运行温度阶段脚本。软件将初始化五秒钟，然后停止。对于温度行为实验，在竞技场的铜砖顶部放置一串白色导电胶带，确保所有边缘都覆盖。

在铜片周围放置一个加热的铝环，并使用干净的纸巾擦拭玻璃盖。将盖子放在铝环的顶部，留下一个缝隙，通过该缝隙可以吹飞，然后点击一个适应的苍蝇小瓶两次，迫使苍蝇到小瓶的底部。使用吸嘴器，捕获一只苍蝇并关闭小瓶，然后再把它放回孵化器。

通过玻璃盖和铝环之间的间隙将苍蝇吹入竞技场，并立即推动玻璃三叶草以缩小间隙。在竞技场周围放置一帧灯光，以确保对称照明，并开始录制视频录制程序。然后按控制计算机的空格键开始运行实验阶段。

要跟踪视频，请打开飞行步骤跟踪软件，并在飞行跟踪器文件夹中打开配置文件。设置视频文件夹中的视频位置以及视频文件中的视频名称。根据竞技场边缘多个点的 x/y 像素坐标，在竞技场设置中指定飞行竞技场的边界。

根据 LED 中心位置的 x/y 像素坐标，在 LED 设置中指定非活动红色 LED 的位置。要检查飞行竞技场边框的位置，请在竞技场设置中将调试设置为 true，单击"保存"并在终端中运行脚本。视频的屏幕截图将显示为蓝色正方形，该方块由竞技场设置中输入的坐标组成。

然后将竞技场设置中的调试更改为 false。单击"保存"，然后再次在终端中运行屏幕以开始跟踪过程。在典型的温度行为实验中，暴露在16、20或24摄氏度的单个苍蝇在实验开始时表现出比5分钟后更高的运动。

温度控制竞技场还可用于比较不同遗传背景的苍蝇行为反应与动态温度变化。例如，在这个实验中，所有被测试物种的速度都根据它们自己的反应曲线随着温度的增加而增加，直到达到最高性能点，之后它们的速度会变衰，苍蝇会灭亡。当个别苍蝇暴露在40摄氏度的中间和一侧瓷砖，另一侧的瓷砖在舒适的22摄氏度野生型苍蝇迅速停止沿竞技场移动，并保持在舒适的位置。

相比之下，经典的记忆突变邓斯苍蝇不断探索竞技场，花更少的时间比控制在舒适的位置。此外，测试温度和位置的组合也可用于了解不同温度受体在动态温度变化期间的功能。正如这个实验所示，在实验中，单个黑色素突变体暴露在不断升高的温度下，同时提供了在22摄氏度下移动的舒适位置。

执行这些过程时，请记住按顺序快速执行这些步骤，以便捕获尽可能多的苍蝇行为。在此过程旁边，其他方法（如负地轴或热扼流圈测定）可用于回答其他问题，例如苍蝇在什么地方正常移动或具有正常的耐热性。这种技术的影响延伸到我们了解神经紊乱或突变，其中温度感知或疼痛发挥作用。

一般来说，对这种方法的新鲜人会挣扎，因为每个步骤本身都很简单，但需要完美协调，所以需要练习这项技术。