시간과 공간에서 온도 변화에 대 한 응답에서 초파리 의 성능을 결정 하는 자동화 된 방법

이 방법은 유전자형 간의 차이, 다른 감각 단서와의 상호 작용 또는 다른 온도 수용체의 기능과 같은 온도 변화에 대한 파리의 반응에 대한 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 시간과 공간을 제어하는 여러 빠르고 정확한 온도 변화를 시간과 공간을 제어할 수 있다는 것입니다. 먼저 20마리의 수컷과 20마리의 암컷 파리를 플라이 푸드 배지 45밀리리터가 들어 있는 사육병에 넣고, 12시간 의 빛 아래 25도 의 섭씨 인큐베이터 안에 병을 넣음으로써 12시간 암울한 사이클을 제공합니다.

10일 후, 이산화탄소 패드에 새로 밀폐된 파리를 최대 4분간 마취시합니다. 그리고 2.5에서 처녀 파리를 수집하기 위해 페인트 브러시를 사용하여 2.5 에서 9.5 센티미터 의 플라이 사육 바이알은 6.5 밀리리터의 신선한 플라이 푸드 매체를 함유하고 있으며, 섹스로 바이알 당 20 개의 파리 그룹으로 분리됩니다. 그런 다음 바이알을 인큐베이터에 5~7일 동안 반납합니다.

온도 제어 경기장을 설정하려면 경기장을 켜고 컨트롤 컴퓨터에서 온도 단계 스크립트를 엽니다. 온도 순서가 제대로 설정되어 있는지 확인하고 각 실험 단계의 지속 시간이 60초로 설정되어 있는지 확인합니다. 시작 실험 블록 섹션에서, 이러한 설정을 확인: 원하는 단계 수, 표시 적색 발광 다이오드의 반복 온 /오프 설정, 단계 당 섭씨 2도 상승, 및 시작 온도로 섭씨 16도.

그런 다음 온도 단계 스크립트를 실행합니다. 소프트웨어는 5 초 동안 초기화 한 다음 중지합니다. 온도 행동 실험의 경우, 모든 가장자리가 덮여 있는지 확인, 경기장의 구리 타일의 상단에 흰색 전도성 테이프의 가닥을 배치합니다.

구리 타일 주위에 가열 된 알루미늄 링을 놓고 깨끗한 조직을 사용하여 유리 덮개를 닦아냅니다. 알루미늄 링 의 상단에 덮개를 놓고, 비행이 날아 갈 수있는 간격을 두고 유리병의 바닥에 파리를 강제로 두 번 공조 비행 유리병을 누릅니다. 입 흡인기를 사용하여 한 번의 비행을 트랩하고 바이알을 닫은 후 인큐베이터에 다시 넣습니다.

유리 커버와 알루미늄 링 사이의 간격을 통해 경기장으로 날아 가서 즉시 유리 클로버를 밀어 간격을 닫습니다. 경기장 주변에 조명 프레임을 배치하여 대칭 조명을 확인하고 비디오 녹화 프로그램으로 녹화를 시작합니다. 그런 다음 제어 컴퓨터의 스페이스 바를 눌러 실험 단계를 실행합니다.

비디오를 추적하려면 소프트웨어를 추적하는 플라이 단계를 열고 플라이 트래커 폴더 내부의 구성 파일을 엽니다. 비디오 폴더에 비디오의 위치와 비디오 파일의 비디오 이름을 설정합니다. 경기장 가장자리의 여러 지점의 x/y 픽셀 좌표를 기반으로 경기장 설정에서 플라이 아레나의 테두리를 지정합니다.

LED 설정에서 비활성 빨간색 LED의 위치를 특정한 위치(LED 중앙 위치의 x/y 픽셀 좌표를 기반으로). 플라이 아레나 테두리의 위치를 확인하려면 디버그를 경기장 설정에서 true로 설정하고 저장을 클릭하고 터미널에서 스크립트를 실행합니다. 비디오의 화면 캡처는 경기장 설정에 입력된 좌표에 의해 형성된 파란색 사각형으로 표시됩니다.

그런 다음 아레나 설정의 디버그를 false로 변경합니다. 저장을 클릭하고 터미널에서 화면을 다시 실행하여 추적 프로세스를 시작합니다. 일반적인 온도 행동 실험에서, 16, 20 또는 24섭씨에 노출된 단일 파리는 5분 후에보다 실험 초기에 더 높은 운동을 나타낸다.

온도 조절 경기장은 또한 동적 온도 변화에 다른 유전 배경에서 비행 행동 반응을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 이 실험에서, 모든 테스트 된 종의 속도는 온도가 증가함에 따라 자신의 응답 곡선에 따라 증가, 최대 성능의 지점에 도달 한 후, 그 후 자신의 속도가 부패하고 파리가 멸망. 개별 파리가 중간과 한쪽 타일의 섭씨 40도에 노출되었을 때, 다른 쪽 타일은 편안한 섭씨 22도에서 야생식 파리가 경기장을 따라 빠르게 움직이지 못하고 편안한 위치에 남아 있었습니다.

대조적으로, 고전적인 메모리 돌연변이 던스는 경기장을 탐험 계속하고 편안한 위치에서 컨트롤보다 적은 시간을 보내고 있습니다. 또한, 온도 및 위치의 조합테스트는 동적 온도 변화 시 다른 온도 수용체의 기능을 이해하는 데도 유용하다. 이 실험에서 설명한 바와 같이 개별 d 멜라노가스터 돌연변이가 온도 증가에 노출된 반면 섭씨 22도에서 편안한 위치가 제공되었다.

이러한 절차를 수행하는 동안 가능한 한 많은 파리 동작을 캡처할 수 있도록 단계를 순서대로 신속하게 수행해야 합니다. 이 절차 옆에 부정적인 지질 세세또는 열 초크 분석과 같은 다른 방법은 파리가 정상적으로 이동하거나 정상적인 내열성이있는 곳과 같은 추가 질문에 대답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 의미는 온도 지각 또는 고통이 역할을 하는 신경 장애 또는 돌연변이를 이해하는 우리에게 확장합니다.

일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 개인은 각 단계가 단순하기 때문에 어려움을 겪지만 기술을 연습해야 하므로 완벽하게 조정되어야 합니다.