这种人血脑界面模型对于研究分子向神经系统的转移非常有用。以及微生物研究达到受感染的脑痛肿瘤。将迷你大脑添加到这个血脑屏障或BBB模型允许研究我们的病原体和分子,导致BBB在大脑中的行为。
演示程序将是弗洛里安巴考,我的实验室的博士生。要建立BBB迷你脑聚酯膜培养装置,将细胞稀释到每插入浓度不完整的内皮细胞培养的5倍10至第四细胞,并将适当的细胞体积添加到每个聚酯膜培养物中插入12孔板。然后,放置插入物和细胞培养培养箱,直到细胞达到100%汇合。
在室温下,用1毫升聚D-晶硅氨酸将她放在一个12井盘上4个小时。接着是每井一毫升层明过夜。用一毫升内皮细胞培养剂代替层醇,辅以5%的胎儿牛血清或FBS。
将位置放在孵化器中一小时。准备迷你颗粒轻轻地尝试在CHME克隆五个细胞的人类神经元星细胞。将细胞颗粒与完整的内皮细胞介质关联。
在计数在3.6倍10至第五神经元和星细胞到0.4倍10至第五CHME克隆五个细胞每井有12井板。并播种12井板。在播种后24小时构建BBB迷你脑,用新鲜的完整内皮细胞介质取代用过的介质,并转移脑微血管内皮细胞涂层聚酯膜培养物插入迷你脑细胞。
然后,将 BBB 许多大脑设备放入孵化器中。为了验证BBB迷你脑内皮渗透性,每井增加1.5毫升的运输缓冲液到新的12井板。并翻转每个过滤器倒置,小心地去除介质,而不影响内皮细胞屏障。
将每个过滤器放在运输缓冲液填充板的一个井中,并在每个井中加入 0.5 毫升路西法黄色。然后将板放入培养箱 10 分钟,然后将过滤器转移到填充 12 井板的新运输缓冲液中。如证明,在建立BBB多脑装置后,在发光室顶部,增加3500个法国黄热病病毒株的平台单元和50微升2%FPS内皮细胞介质。
接种控制BBB迷你大脑与50微升2%FBS内皮细胞介质没有病毒。然后将病毒暴露在孵化器中的BBB许多大脑设备24小时。第二天,取出插入物,以确定内皮细胞的渗透性和配套,就像所展示的一样。
从每一个井中保存一毫升样品,以确定中间隔间中的病毒滴度。轻轻插入,以避免发光室泄漏到外光隔间。要研究神经元在血脑屏障上的载体,请将感兴趣的生物分子添加到插入物中,并将板返回细胞培养箱。
24 小时后远程插入并确定内皮渗透性。然后用适当的抗体染色许多脑细胞,以检测迷你大脑中感兴趣的生物分子的存在。人类脑微血管内皮细胞表达所有连接器、Efflux 运输器或运输器的子集,这些子集是它们生物功能的关键相关蛋白质。
一些法国神经热带病毒株的黄热病病毒可以在24小时内穿过血脑屏障。然后,病毒通过脑细胞内的病毒的增殖来放大未来两天。此外,当这种神经侵入性病毒群连续通过迷你脑细胞并严格与病毒载量相关时,特定的病毒生物标志物的表达受到刺激。
被添加到隔间细胞穿透分子的极限后,Neuro-Tag Neurovita 穿过血脑屏障,能够瞄准人类神经元。细胞穿透分子神经标签 Delta 神经维塔穿过内皮细胞屏障, 但目标目标效率较低, 人类神经元.被添加到小中间隔间后,细胞穿透分子 Neuro-Tag Neurovita 穿过血脑屏障,在受伤后能够再生人类神经元的轴突。
与细胞穿透分子神经-塔格神经维塔三角洲,神经维塔的非活动形式。当应用后轴突抓细胞穿透分子神经标签神经维塔触发神经保护受伤的神经元和x区再生。严格为了实践的缘故。
不要过度使用 I 细胞通道。尽量保持一些中等和地区的外表,并检查支原原的缺乏。迷你大脑和药物之间的相互作用是感兴趣的微生物,可以通过化学化这个或称为经典生物学的技术的脚本进一步研究。