使用电压敏感染料在脑切片中进行宽场单光子光记录

带电压敏感染料的光学记录方法被认为是一种理想的技术，可以直观地显示大脑是如何工作的。这种方法使我们能够记录神经心理动态稳定可靠地超过12小时，给我们一个心理活动的看法。我们正在努力扩展应用，以检测化学品在开发的所有阶段引起的电路变化，例如对母亲的宝贵酸应用。

这项技术已经很成熟了。请尝试按照此处介绍的方法复制研究。要开始此过程，请将被斩首的头浸入冰冷的 ACSF 中，放在不锈钢手术托盘中。

在一分钟内提取大脑，并放在一个烧杯中含有冷藏ACSF五分钟。接下来，用手术刀将中线的大脑部分分开，将两个半球放在4%的阿加块上。然后，将两个半球的大脑块放在 4% 的阿加块上。

用滤纸擦拭块中多余的 ACSF。随后，将超级胶水应用到振动台。将胶块放在其上，然后用滤纸擦拭过多的粘合剂。

轻轻地从脑粘滞块顶部轻轻涂抹少量冰冷ACSF，以帮助凝固多余的超级胶水，并防止胶水覆盖大脑和干扰切片。之后，将平台固定到振动器托盘并倒注修改后的 ACSF。将振动器设置为慢速，并且刀片频率达到其最大设置。

然后开始切片。按顺序将切片放在切片室的一角，以便可以轻松区分切片的顺序。通常可以从一个半球获得三到五个切片。

接下来，用30针切断脑干部分。使用小倾斜的油漆刷，将切片放在用有机玻璃环持有的膜过滤器上。将环放在潮湿的回收室中，并固定盖，以保持内部压力高。

将切片放在膜过滤器上时，调整切片在环内的方向和位置，以确保其居中良好且具有一致的方向。将试样在28摄氏度下保存30分钟，然后在室温下至少保存10至30分钟。要染色切片，请轻轻将 100 微升染色溶液涂抹在每片上，并在 20 分钟内孵育室温。

接下来，在容器中准备 50 到 100 毫升的 ACSF。将带试样环放在内以冲洗染色溶液。然后，将冲洗过的切片转移到另一个孵化室。

在实验前等待一个多小时的恢复。要开始此过程，请打开放大器、计算机和摄像机系统并打开软件。将ACSF倒入50毫升的管子中，用碳原泡。

使用近光泵循环 ACSF，将流量调整为每分钟约 1 毫升。然后，调整吸液器的高度，使实验室内的液位始终保持不变。将接地电极放在腔室中。

随后，用少量ACSF填充玻璃电极，并放在电极支架中。将支架连接到操纵器的杆上。使用放大器，确保电极电阻约为 1 兆兆兆赫。

在记录会话中，将一片从湿润室转移到实验室。将环的边缘牢固地压入硅胶 O 环中。小心不要破坏膜或实验室的底部。

在显微镜下，将刺激电极的尖端和场位记录电极放在切片上。通过提供刺激来检查引起的反应。确认视场覆盖了光学记录系统中的右神经回路。

接下来，将激发光强度调整到相机最大容量的 70 到 80%。使用荧光光源，使用采集系统调整焦点。然后，在采集后开始记录和分析图像采集软件中的数据。

此图显示了小鼠海马切片CA1区域沙弗线子醇电刺激时具有代表性的光信号。这些连续图像显示光学信号之前，任何空间和时间过滤器应用，而这些图像显示相同的数据后，应用五五五立方滤波器两次。由于帧速率高、空间分辨率高，滤波器的应用没有改变信号，而是滤光了在单个试验中以像素为单位记录的时间过程中也可以观察到的噪声。

以下是小鼠和大鼠之间海马切片CA1区域的典型反应的比较。在小鼠海马切片24毫秒后，在CA1远端观察到小的超极化响应，但更大规模的超极化响应超过了大鼠海马切片中的去极化响应。一旦切片被染色，他们应该持续超过12小时，你可以执行其他电生理录音。