目前的协议在大型动物模型中详细显示了整个视网膜类器官的视网膜下递送，旨在开发视网膜变性的细胞治疗方法。该技术的主要优点是它允许将类器官直接输送到目标组织，即视网膜。该技术旨在治疗晚期致盲性视网膜退行性疾病，例如年龄相关性黄斑变性、色素性视网膜炎或先天性黑朦虫病。
演示该程序将是彼得森琼斯博士。对于类器官的视网膜下植入，使用史蒂文斯肌腱切开剪刀在四个月大的过夜禁食麻醉猫中进行 0.5 至 1 厘米的外眦切开术，并将适当大小的 Barraquer 眼睑窥器放入切口以保持眼睑打开，手术助理在整个过程中定期用 BSS 冲洗角膜。使用0.5个Castroviejo角膜绑钳和一个小蚊子止血器轻轻抓住角膜缘旁边的延髓结膜。
将两条 6-0 丝线缝合到紧邻 4 点钟和 8 点钟位置的视角结膜中，以保持眼睛处于主要凝视状态并缩回第三眼睑。用小蚊子止血器夹住缝合线的末端以帮助它们进行操作，并在12点钟位置将另一条缝合线部分穿过角膜缘的厚度，注意不要穿透眼睛。松散地打结缝合线，将末端剪短，并在紧邻4点钟位置的视角膜中放置一条固定缝合线，以保持眼睛和主要凝视。
在 10 点到 2 点钟之间反射延髓结膜，并使用肌腱切开剪刀将结膜切开距离角膜缘 2 到 3 毫米。破坏结膜并清除榫卯囊，以暴露距离视角膜缘 3 至 5 毫米的两点钟和 10 点钟玻璃体切除术端口部位的巩膜。使用卡尺识别硬皮切开术的部位，避开猫可能突出的主要巩膜血管。
为右撇子外科医生规划在 10 点钟位置的器械端口处设置一个 3 毫米的区域，预先放置 6-0 或 7-0 多乳糖十字图案缝合线，而无需绑在拟议的菌核切除术部位。缝合线到位后，让助手抓住 12 点钟位置的缝合线以帮助将眼球保持在适当的位置，并使用 0.12 毫米的 Castroviejo 镊子将组织固定在硬化切开部位旁边。使用穿刺器通过巩膜引入一个 23 号的玻璃体切除术端口，位于 2 点钟和 10 点钟位置，朝向视神经倾斜以避免接触晶状体，并使用绑钳轻轻推动冲洗口以确定尖端是否可以在玻璃体内可视化。
让助手将Machemer放大冲洗玻璃体切除术镜片放在角膜上，以便观察眼睛的后段，并通过仪器端口放置一个23号玻璃体切除术探针切割器，以执行部分核心玻璃体切除术。接下来，将含有一毫升曲安奈德溶液的一毫升注射器的针头引入仪器端口，并注入250至500微升晶体悬浮液。当溶液交付后，将玻璃体切除术探头通过器械端口推进到靠近视神经头，端口背对视网膜表面。
使用高真空帮助将玻璃体面与视网膜分离，将注射器通过仪器端口插入视网膜表面，然后挤出套管尖端。轻轻按压视网膜表面的尖端，让助手轻轻快速推动注射器柱塞以启动视网膜脱离，降低注射压力以允许视网膜脱离缓慢增加，直到达到所需的尺寸。使用注射器的 41 号套管稍微扩大脱离，直到可以引入视网膜剪刀，并移除 10 点钟的巩膜端口。
然后使用面向视神经的2.850毫米直缝刀，以避免接触晶状体以扩大该部位的硬化切开术。使视网膜切开术远离视神经，以避免损伤源自移植区域的视网膜神经纤维，并避免切割视网膜主要血管以降低出血风险。要植入类器官，请通过扩大的硬膜切开术将装有类器官的玻璃毛细管插入视网膜切开部位，并使用毛细管的尖端稍微打开视网膜切开术以允许进入视网膜下泡口。
让助手再次缓慢按下注射器的柱塞，将类器官注射到视网膜下泡中。BSS 应进行类器官、器官的检查，并将视网膜切开术冲洗开开。当所有类器官都已交付后，将玻璃毛细管留在原位几秒钟，然后慢慢从眼睛中取出毛细管，注意避免任何液体突然释放。
去除毛细血管后，使用预先放置的十字形缝合线闭合硬化术。让助手移除输液口，并快速绑住硬皮切开术缝合线，并以简单的连续模式用聚乳素缝合线闭合围膜。用 6-0 聚乳糖缝合线和 8 字形皮肤缝合线闭合外眦切开术以进行外眦缝合，并使用简单的中断皮肤缝合线闭合伤口的其余部分。
然后给予适当的术后类固醇和抗生素鸡尾酒。人多能干细胞衍生的视网膜类器官负荷可以在注射装置的玻璃套管内和手术过程中通过直接可视化确认。视网膜下间隙内类器官的存在可以通过术后眼科检查和眼底成像来确认。
在安乐死之前，还可以进行共聚焦扫描激光检眼镜检查和光谱域光学相干断层扫描成像以评估类器官的位置。这些技术可用于证明视网膜类器官在神经视网膜和受体眼睛的视网膜色素上皮之间的视网膜下空间中的持久性。组织学和免疫组织化学分析可用于说明免疫抑制动物大眼睛视网膜下间隙内异种图的存活情况。
只有那些精通玻璃体视网膜手术的人，例如训练有素的兽医眼科医生或熟悉猫眼与人眼物种差异的玻璃体视网膜外科医生，才应该进行此手术。本视频中介绍的技术应适用于用于将玻璃体视网膜手术技术转化为临床的其他大型动物模型。
