癫痫小鼠模型中热诱发癫痫发作的行为筛查

GEFS+突变可引起患者热性惊厥。研究GEFS +小鼠中体温过低引起的癫痫发作的能力使我们能够检查特定突变与癫痫发作特征之间的关系。数字温度控制器有助于以可重复的方式设置加热盒中的温度梯度。

因此，小鼠体温可以以缓慢而稳定的速度升高。该协议可用于确定可用于减少或消除热性惊厥的潜在疗法，例如药物或饮食限制。为了将直肠温度探头插入小鼠而不会受伤，我们建议短暂麻醉小鼠，并润滑直肠探头的尖端。

首先使用电源打开按钮打开鼠标加热室，然后按加热按钮。使用数字温度控制器上的键盘，将热室的温度设置为50摄氏度。在加热室的地板上铺上穗状垫料。

将视频录制摄像机安装在加热室前面。将直径为140毫米的培养皿与厚厚的薄纸层排成一行，然后将其放在冰上作为冷却垫。对于筛选测定，确保小鼠的体重为15克或更多。

在开始该过程之前，请确认用脚趾捏住鼠标完全麻醉。用润滑剂涂覆直肠温度探头的金属尖端，并将其轻轻插入鼠标。用胶带将直肠探头固定在小鼠尾部。

将鼠标放入衬有玉米棒垫的新恢复笼中。启动计时器并观察小鼠五分钟，同时监测核心体温，直到小鼠完全从麻醉中恢复过来，温度稳定在35至36摄氏度。在五分钟结束时，注意小鼠的体温作为零分钟的初始体温。

将鼠标快速转移到预热的鼠标加热室的地板上，开始实验试验。将鼠标放入预热的鼠标腔室后，启动相机和秒表，每隔一段时间提高加热室的温度，使鼠标的体温以每分钟25、2.5摄氏度的速度升高。在实验期间，开始以一分钟的间隔记录小鼠的体温。

在9.5分钟时，将热室的温度设置为55摄氏度，以使热室的温度在第10分钟前稳定在55摄氏度。同样，在第20分钟将热室的稳定温度提高到60摄氏度。每次癫痫筛查试验持续30分钟。

如果小鼠经历癫痫发作，记录癫痫发作期间小鼠的体温，作为癫痫发作阈值温度。记下鼠标显示的癫痫发作行为特征，然后迅速从腔室中拿起鼠标并将其放在冷却垫上。如果小鼠在30分钟的观察期内没有经历热诱发的癫痫发作，或者小鼠的体温达到44摄氏度，则将鼠标放在冷却垫上。

当小鼠的体温下降到36到37摄氏度时，将小鼠转移到恢复笼中。要从鼠标上取下直肠探头，请小心地剪下小鼠尾巴和直肠探头线之间的胶带。擦拭并用70%乙醇清洁直肠探头的金属尖端。

观察鼠标，直到它恢复，然后再将其放回家笼。继续监视鼠标的状态。标记实验试验的结束。

将小鼠加热室的温度重置为50摄氏度，并在下一次测定之前使其平衡。在热发作测定中，使用加热方案每分钟记录小鼠的平均体温，并评估体温随时间变化的速率。在各自的遗传背景下，杂合突变体和野生型小鼠之间的体温变化率没有差异。

小鼠的实验组和对照组在暴露于体温周期性升高时表现出不同的行为。所有来自129X1或B6NJ遗传背景的杂合突变小鼠都表现出热诱导的癫痫发作。在129X1富集背景中，没有一只野生型小鼠经历过癫痫发作，而来自癫痫发作敏感B6NJ背景的小鼠中只有三分之一显示出癫痫发作。

129X1突变小鼠的平均癫痫发作阈值温度与B6NJ小鼠的平均癫痫发作阈值温度没有显着差异。三分之一的B6NJ野生型小鼠确实表现出热诱导的癫痫发作，其癫痫发作阈值温度显着高于B6NJ杂合突变小鼠。使用改良的拉辛量表测量癫痫发作的严重程度。

129X1富集背景中杂合突变小鼠的最大Racine评分与B6NJ遗传背景中的杂合突变小鼠没有显著差异。在设置加热方案时，请确保小鼠体温不会以每分钟25摄氏度的速度上升，否则可能对动物的健康有害。将加热方案与同时进行脑电图记录相结合将非常酷，这将使我们能够将不同的大脑活动模式与不同类型的癫痫发作行为相关联。