该技术能够在共培养基质细胞分泌因子的影响下鉴定具有不同侵袭能力的细胞。该技术评估来自共培养基质或免疫细胞的分泌因子对细胞侵袭的影响。它还允许恢复和分析异质细胞混合物中存在的侵袭细胞亚群。
该技术可以确定哪些肿瘤含有导致转移的侵袭性细胞亚群。侵袭性癌细胞的捕获和分析可以为治疗决策提供信息。为了开始细胞培养，洗涤粘附细胞培养物与1X磷酸盐缓冲盐水的约70%汇合度。
然后加入0.05%胰蛋白酶和EDTA溶液以去除细胞。用含有血清的细胞培养基中和胰蛋白酶溶液，并使用细胞悬浮液的等分试样计数细胞。将所有三个无菌室放在组织培养罩中。
将旋钮定位在下腔室的短侧，并定向下腔室，使旋钮面向实验者。从下腔室向每个孔中加入90微升培养基中的30，000至50，000个细胞，而不会形成任何气泡。在两个下腔室中使用5%的胎牛血清补充培养基作为细胞运动的阳性对照，并使用0%血清补充培养基作为阴性对照。
将下腔室旋转90度，使其在引擎盖中沉降10至15分钟。然后将中间腔室放在顶部，以便下腔室上的旋钮滑入中间腔室的凹口。垂直向下推动腔室，直到从组件的每个长边听到咔嗒声。
向中室的所有孔中加入160微升无血清培养基。确保在填充孔后可以看到圆顶形的半月板，并将顶部腔室中的电极朝下放置在中间室上，以对齐中间和顶部室上的蓝点。垂直向下推腔室，直到从组件的每个长边都能听到咔嗒声。
向顶部腔室中加入 20 至 50 微升无血清培养基。将组件安装在组织培养箱中的两用细胞分析仪上，等待30分钟，然后再测量背景。打开细胞分析仪软件，然后选择要使用的底座，然后单击消息选项卡，并确保它显示“连接正常”，以确保阵列放置在底座中，电极与传感器对齐良好。
单击实验注释选项卡，然后填写有关实验的所有可能信息。然后单击布局选项卡并填写数组布局的说明。然后单击计划选项卡，从步骤菜单中添加两个步骤，一个具有一次扫描的后台步骤和一个包含 100 次扫描的测试步骤。
一旦阵列在两用细胞分析仪培养箱中放置30分钟，单击播放按钮开始后台测量。背景测量完成后，从底座上取下阵列并将其放回细胞培养罩中。然后将100微升无血清培养基中的30， 000至50， 000个细胞加入顶室的每个孔中。
这些是电极在成功通过膜迁移后将检测到的细胞。让组件在烟罩中静置 30 分钟，然后安装在用于阻抗测量的双用电池分析仪上。将数组放回两用单元分析器中，并检查消息选项卡中的“连接正常”消息。
单击播放按钮开始阻抗测量，然后单击绘图选项卡以监视信号的进度。如果在 25 小时之前到达终结点，请单击执行下拉菜单中的中止步骤。若要导出数据，请右键单击图形，选择“以列表格式复制”，然后将数据粘贴到电子表格中。
在双用途细胞分析仪上实时监测迁移速率，以确定停止兴趣点。完成后，从两用细胞分析仪上卸下组件并将其放入组织培养罩中。准备适当数量的1.5毫升微量离心管，以从感兴趣的孔中收集细胞。
将组件放在10厘米的培养皿中，以便在腔室分离时容纳液体。将中间腔室长边上的柔性卡扣端向内推，直到听到咔嗒声，然后拆卸顶部腔室并将其倒置到新的10厘米盘中。使用带有13毫米刀片的细胞提升器从具有相同实验条件的所有孔中收集细胞。
将刀片冲洗或浸入1X磷酸盐缓冲盐水中，以将细胞收集在1.5毫升微量离心管中。然后将细胞以500倍G旋转5分钟，并繁殖这些收集的细胞或进行终点分析，如单细胞RNA测序。对存在或不存在基质细胞侵袭细胞的评估表明，当辐照的Swiss-3T3成纤维细胞J2菌株位于底部腔室中以交换两个细胞系之间的因子时，MDA-MB-231细胞侵袭增强。
有趣的是，当3T3 J2细胞数量增加一倍时，MDA-MB-231入侵增加。另一方面，MCFDCIS细胞的侵入克隆DCIS-Delta Four的侵袭率似乎受到与3T3 J2细胞串扰的抑制，这表明三室阵列的价值应用来测量基质的不同作用。在这种情况下，成纤维细胞对细胞进行侵袭。
与DCIS细胞分泌的因子不同，人脐静脉内皮细胞对MDA-MB-231细胞分泌的因子的侵入性更强，这与侵袭性肿瘤招募内皮细胞用于血管形成并随后扩散到循环中的能力一致。患者来源的异种移植物细胞从顶部腔室侵袭增加，以响应于共培养的人骨髓免疫细胞。有趣的是，与人骨髓免疫细胞的底部腔室中存在2%的血清对于患者来源的异种移植物入侵至关重要。
孔可以涂覆细胞外基质以模仿基底膜屏障。可以将治疗剂添加到孔中的培养基中以监测其对入侵的影响。
