多端根结核细胞迁移的实时监测

这种体外共培养系统可用于识别人类胶质瘤细胞迁移的新细胞和分子机制，并可能用于体外药物疗效测试。该技术的主要优点是能够实时研究人类胶质母细胞细胞和轴子之间的相互作用。演示这个程序的将是约翰·泽佩奇，一个研究生从我的实验室。

为了组装分离的培养皿，将胶原蛋白库存溶液稀释至每毫升500微克，在无菌蒸馏水中彻底混合。使用无菌转移移液器，用稀释的胶原蛋白溶液填充 35 毫米培养盘。然后稍微倾斜盘子，取出溶液，留下一层胶原蛋白薄膜。

将溶液分配到下一个 35 毫米的盘中。重复此过程，根据需要添加更多胶原蛋白溶液，直到所有盘子都涂覆。为了聚合胶原蛋白，在层流罩中，用三毫升氢氧化铵的湿纱垫，将托盘盖住15分钟。

取下纱布垫，让 35 毫米的盘子干燥。接下来，使用金属文件从 18 量表指针的点上文件，以制作钝尖。将针头浸泡在70%乙醇中进行消毒。

将硅胶润滑脂涂抹在隔间底部。确保润滑脂整齐地放置，并在所有角落重叠。这项技术可能非常具有挑战性，因此我们建议您在设置隔离室之前，花额外的时间练习涂抹正确数量的润滑脂，以确保良好的生长。

慢慢工作也很重要。设置更多的房间，超过你认为你将需要，所以你有额外的，如果出了问题。从 35 毫米的盘子上取下盖子，反转盘子，将划痕放在室内。

用一对钳子轻轻敲下盘子的底部。将润滑脂室涂在盘子上时，不要用太硬的水龙头。否则，轴子将无法在下方生长到相邻的腔室。

使用止血钳轻轻翻转盘子。松开钳子。将一堆润滑脂放在中心隔间底部。

用补充的神经元基础介质填充每个腔室。根据需要检查有无泄漏和密封泄漏与硅胶润滑脂。继续组装所有文化菜肴，并在 37 摄氏度和 5% 的二氧化碳下过夜储存。

隔离室允许使用不同的药理试剂，以及比较和对比同一板上两个孔的结果的能力。要播种含有GBM神经球的已准备培养物，首先用每个直肠分室中含有10%FBS的补充NBF替换培养物。接下来，将 P20 移液器设置为 10 微升，从培养皿中绘制一个 GBM 神经球。

将移液器的尖端放在离中心室最近的离心室中，而不接触轴孔，然后缓慢排出 GBM 神经球，使移液器轻轻地落在轴上。将培养物留在生物安全柜中，在室温下保持一小时，以便连接 GBM 神经球。该方法可用于测试治疗脑肿瘤的药理化合物。

该方法也适用于外周和中枢神经系统的其他疾病，如脱髓性神经病变和多发性硬化症。在该协议中，纯化的DHG轴突与HCG一起播种，形成双阳性GFAP和KI67肿瘤样结构，这些结构集成在红色肿瘤标记GFAP指示的轴突网络中，而表达绿色荧光蛋白的单个HGCC则结合或结合轴突迁移。在骨髓DHG oligodend细胞联合培养物上添加HGC表明，HBC与红色染色的骨髓轴子一起迁移，并通过伪波迪亚的形成远离肿瘤质量。

一旦这项技术得到完善，我们能够利用它实时研究人类GBM干细胞的迁移。我们还能够研究在添加新的治疗性小分子抑制剂后对细胞迁移的影响。此处显示了入侵骨髓的骨髓细胞 Drg 轴龙区域性的 Gbm 球体。

此处描述的协议可以作为其他仿生三维外活体系统的基础，旨在评估新药物治疗的效果。在处理人源细胞时，应始终小心谨慎。应佩戴适当的 PPE，并完成血液传播的病原体培训，以便了解使用患者衍生组织的风险。

氢氧化铵应小心处理，应戴上手套、实验室外套，并在发动机罩中工作，以防止接触这种化学物质。