许多评估肝外胆道系统的报告报告说,他们获得了样本,但没有获得样本的方式,这引发了可比性问题。该技术的主要优点是可以解剖整个肝外胆道系统,并且可以无创伤地去除污染细胞。我们的解剖方案通常可以应用于小鼠新生儿胆管疾病的实验方法,旨在解剖肝外胆道系统。
该方案的一些特征,例如,将胃附着在十二指肠上,可能有助于十二指肠闭锁的研究,以便通过胃表达的部分消化的乳汁正确定向。一开始,该技术可能需要一些时间进行培训。练习并遵循循序渐进的方法将提高速度和结果。
首先,将消毒和高压灭菌的器械放在手术台旁边的无菌表面上。在腹膜上切开后,沿着左额腋线将切口扩大到斩首的位置。用无创伤钳从左侧到右侧去除皮肤。
在显微镜下,握住脾脏周围的腹膜。轻轻地将其提起,直到腹膜类似于帐篷状结构,并在中心切一个一毫米的孔。等待腹膜帐篷充满空气。
在由下肋骨、腹部外侧区域和下膀胱区域构成的窗口中切掉腹膜。确保完全进入肝脏、胆管系统、胃、小肠和结肠。通过小心地将剑突拉到颅腹位置来检查胆囊和胆管。
避免镰状韧带撕裂,这可能导致胆囊从胆管系统撕裂。然后,释放剑突的拉力。轻轻拉下十二指肠以释放胆管系统。
然后,通过识别十二指肠进行下部 En-bloc 动员,十二指肠将胆管系统连接到十二指肠。切开十二指肠,向右侧约两厘米处。然后,切开幽门区域。
确保胃内容物存在于切割位置和十二指肠之间的幽门区域。要进行上部整体动员,请轻轻拉动剑突并进入镰状韧带。切开胆囊之间的镰状韧带一厘米,靠近剑突。
切开肝脏和胸部之间的连接结构,例如食道、下腔静脉、胸主动脉以及围绕肝脏裸露区域的所有韧带。此外,切断所有背侧剩余的组织连接。在20倍显微镜放大倍率下,将整体样品放在泡沫垫上。
通过在正确的解剖位置重新组织样本来组装样本。使用轻柔的运动,使十二指肠的口腔和口腔部分变平。使用无创伤镊子,在十二指肠处开始扁平运动,并继续到切削刃。
然后,在十二指肠的口腔部分抚平胃的白色浆状内容物。识别十二指肠的口腔和腹侧部分,以排除可能的胆管旋转。在解剖胆管之前切掉大块残留的肝组织。
经过几次刮擦动作后,将样品转移到泡沫垫上的清洁位置。使用背景中较少挤压的肝组织来优化EBDS和不需要的细胞之间的区分视图。处理肝十二指肠韧带,直到孤立的EBDS仍然存在。
观察肝动脉和门静脉以白色和非常脆弱的细丝形式出现,在十二指肠上口服约三到五毫米。小心地,用轻轻拉动左侧来取下这根细丝。确保刮擦运动从胆管系统开始并通向肝脏边界。
使用该协议,从9天大的小鼠新生儿中解剖EBDS。从胆囊到十二指肠的孤立EBDS长度小于10毫米,脆弱胆总管的直径从0.05到0.2毫米不等。苏木精伊红染色在具有开放腔的EBDS的纵向切片上进行。
在管腔周围发现胆管细胞为单层,并染得更深。研究人员应共享和标准化解剖和注射方案等操作技术,以提高其研究和结果的可比性和快速可用性。先前的解剖对于组织学和单细胞方法是有利的,例如分离胆管内和胆管外细胞,因为它可以减少细胞培养污染。