Evaluation of the Impact of a New Cooling Cell Processor System on Islet Cell Isolation Facility

嗨，我是 Jihad 博士，中心 P 实验室主任。今天本视频的目标是展示用于孔眼隔离设施的经过调整的冷却电池处理器，对环境以及电池的回收没有影响。首先在 4 摄氏度下预冷轻密度和重密度梯度以及细胞处理器套件。

接下来，通过预冷 45 分钟来准备细胞处理器。将预冷细胞处理试剂盒插入标准乙醇冷却双夹套梯度制备器的细胞处理系统中。连接两个玻璃腔室并将它们放在磁力搅拌上 夹住两个腔室之间的管道。凉。

梯度制造器，带有乙醇循环冷却器，冷却后在 0 摄氏度。将泵速设置为 150 mL/min，以在袋底部用 130 mLL 的重密度梯度填充腔室。一旦大梯度进入袋子中，将止血钳合上两个腔室之间。

然后将 130 毫升高密度添加到前烧杯中，向后烧杯中加入 140 毫升低密度梯度。接下来，准备人单核血沉棕黄层细胞，以便从血库提供的全血废物中收集的多个混合匿名血沉棕黄层中纯化。

分离后，使用设置为每分钟 25 毫升的蠕动泵，将 5 毫升比重类似于低密度单核细胞悬液加入转移袋中的 95 毫升高密度梯度培养基中。使用预先校准的热探针，将 30 mL 单核细胞悬液上载到预形成的梯度中。不断。使用连接到无菌热探针的数字热电偶测量细胞处理器内部的温度。

在此过程中监测梯度和细胞的温度。在梯度加载结束时，将 Cell Processor 设置为 537 G，以最大限度地减少转子产生的热量。关闭单元处理器，让液压系统恢复到运行前的水平并释放空气。

然后以 537 G 重新启动细胞处理器，并添加 130 mL 重梯度和 140 mL低密度梯度，以 50 mL/min 的流速和 4.3 °C 的流速创建连续密度梯度。接下来，以每分钟 25 毫升的流速和 6 摄氏度的流速将 30 毫升 Buffy 外壳细胞悬浮液加载到负载密度梯度的顶部。细胞加载后，5 分钟后向细胞处理系统中加入 50 mL 洗涤液。

以每分钟 100 毫升的流速和 5 摄氏度的填充管收集 12 个瓶子中的旋转梯度，其中一个装有 100 毫升洗涤培养基和 150 毫升细胞。然后用 225 毫升洗涤培养基和 25 毫升细胞填充试管 2 至 12。洁净室环境下C级和B级的空气颗粒物评估显示，按照洁净室、GMP C级、B级和BSL三项标准，空气中颗粒物没有过量的0.5和5微米。

在前四个步骤中，没有观察到梯度温度的显著差异，两个处理器都保持了大约 4.5 摄氏度。然而，在离心后和收集步骤中，两个处理器的收集步骤开始和结束时温度都会升高。此外，冷却的细胞处理器会影响人类细胞纯化。

离心后测定效率和活力。收集的细胞温度略微上升至 8.5 摄氏度。主动空气采样和无菌筛查显示没有生长。