مرحبا ، أنا دكتور جهاد ، مدير مختبر المركز P. الهدف اليوم من هذا الفيديو هو إظهار معالج خلية مبردة مكيف يستخدم في منشأة عزل العيينة دون أي تأثير في البيئة وكذلك في استعادة الخلايا. ابدأ بالتبريد المسبق لتدرجات الكثافة الخفيفة والثقيلة ومجموعة معالج الخلية عند أربع درجات مئوية.
بعد ذلك ، قم بإعداد معالج الخلية عن طريق التبريد المسبق لمدة 45 دقيقة. أدخل مجموعة معالج الخلية المبردة مسبقا في معالج الخلية لصانع التدرج المزدوج المبرد بالإيثانول القياسي. قم بتوصيل الغرفتين الزجاجيتين ووضعهما على تحريك مغناطيسي ، وقم بتثبيت الأنبوب بين الغرفتين. برد.
صانع التدرج مع مبرد دائري للإيثانول عند صفر درجة مئوية بعد التبريد. اضبط سرعة المضخة على 150 مل في الدقيقة لملء الغرفة ب 130 مل من تدرج الكثافة الثقيلة في الجزء السفلي من الكيس. بمجرد أن يكون التدرج الثقيل في الكيس ، أغلق الإرقاء بين غرفتين.
ثم أضف 130 مل من الكثافة العالية إلى الدورق الأمامي و 140 مل من التدرجات منخفضة الكثافة إلى الدورق الخلفي.Dec. قم بتثبيت الإرقاء بين الغرفتين ، ثم اضبط سرعة المضخة 50 مل في الدقيقة لإنشاء تدرج مستمر بين غرفتين. بعد ذلك ، قم بإعداد خلايا معطف مصفرة أحادية النواة للتنقية من العديد من معاطف بافي المجهولة التي تم جمعها من فضلات الدم الكاملة التي يوفرها بنك الدم.
بعد الفصل ، أضف خمسة ملليلتر من الثقل النوعي الذي يشبه تعليق الخلية أحادية النواة منخفض الكثافة إلى 95 مل من وسط التدرج عالي الكثافة في كيس نقل باستخدام مضخة تمعجية مضبوطة على 25 مل في الدقيقة. قم بتحميل التدرج المشكل مسبقا بسعة 30 مل من تعليق الخلية أحادية النواة باستخدام مسبار حراري معاير مسبقا. استمرار. قم بقياس درجة الحرارة داخل معالج الخلية باستخدام مزدوج حراري رقمي متصل بمسبار حراري معقم.
مراقبة درجة حرارة التدرجات والخلايا أثناء العملية. في نهاية تحميل التدرج ، اضبط معالج الخلية على 537 G لتقليل الحرارة الناتجة عن الدوار. قم بإيقاف تشغيل المعالج الخلوي للسماح للنظام الهيدروليكي بالعودة إلى مستويات ما قبل التشغيل وتحرير الهواء.
ثم أعد تشغيل معالج الخلية عند 537 جم وأضف 130 مل من التدرجات الثقيلة و 140 مل من التدرجات منخفضة الكثافة لإنشاء تدرج كثافة مستمر بمعدل تدفق 50 مل في الدقيقة و 4.3 درجة مئوية. بعد ذلك ، قم بتحميل 30 مل من تعليق خلية معطف بافي فوق تدرج كثافة الحمل بمعدل تدفق 25 مل في الدقيقة وست درجات مئوية. بعد تحميل الخلية ، أضف 50 مل من محلول الغسيل إلى معالج الخلية بعد خمس دقائق.
اجمع التدرج المغزول في 12 زجاجة بمعدل تدفق 100 مل في الدقيقة وخمس درجات مئوية أنبوب تعبئة ، واحد به 100 مل من وسائط الغسيل و 150 مل من الخلايا. ثم املأ الأنابيب من اثنين إلى 12 ب 225 مل من وسائط الغسيل و 25 مل من الخلايا. أظهر تقييم الجسيمات المحمولة جوا في بيئة الغرفة النظيفة والدرجة C والدرجة B أنه لم يكن هناك فائض من 0.5 وخمسة ميكرون من الجسيمات المحمولة جوا وفقا لمعايير الغرفة النظيفة ، GMP من الدرجة C ، الدرجة B و BSL الثلاثة.
لم يلاحظ أي اختلاف كبير في درجات حرارة التدرج خلال الخطوات الأربع الأولى مع الحفاظ على كلا المعالجين حوالي 4.5 درجة مئوية. ومع ذلك ، بعد الطرد المركزي وأثناء خطوات التجميع ، ارتفعت درجة الحرارة في بداية ونهاية خطوات التجميع لكلا المعالجين. علاوة على ذلك ، تؤثر معالجات الخلايا المبردة على تنقية الخلايا البشرية.
تم تحديد الكفاءة والجدوى بعد الطرد المركزي. ارتفعت درجة حرارة الخلايا التي تم جمعها قليلا إلى 8.5 درجة مئوية. لم يظهر أخذ عينات الهواء النشط وفحص العقم أي نمو.
