AC-DC Electropenetrography for the Study of Probing and Ingestion Behaviors of Culex tarsalis Mosquitoes on Human Hands

我们小组正在使用 EPG 研究虫媒病毒和其他因素如何影响血液喂养过程中发生的探测和摄入行为，因为许多病原体会纵媒介行为以增强传播。基本上，我们正在研究蚊子叮咬过程中会发生什么，以及这些行为如何影响病原体传播和疾病病理学。从历史上看，EPG 主要用于研究植物取食昆虫。

最近开发的用于采血节肢动物的 AC-DC EPG 程序使我们能够以前所未有的细节研究采血过程中发生的探测和摄入行为，而无需侵入性程序，可能允许开发新的管理策略。在吸血节肢动物上使用 EPG 的最大挑战是将波形与流涎和病原体传播等生物活动相关联。根据波形的电气起源和文献，我们有强有力的假设，但我们仍然需要实证证据。

首先，将玻璃牧场移液器的尖端穿过火焰，轻轻旋转移液器。检查直径并重复该过程，使移液器达到所需的尺寸。要制作昆虫吸液器，请用蚊帐覆盖改良牧场移液器的大端，并插入连接到实验室吸液器的硅胶管中，用电工胶带固定连接处。

对于记录电极，用新鲜的保鲜膜包裹泡沫块，用于固定准备好的昆虫存根和有线蚊子。用剃须刀片刮擦铜线的顶部 1 厘米，直到四面都有光泽。然后将直径为 0.025 毫米的金线切割成 4 到 5 厘米长的块。

将金属丝放在用胶带遮住的自闭合镊子中，以免使金属丝凹陷，从铜丝的干净尖端开始，轻轻地将金丝缠绕在昆虫短根的铜线上三次。使用解剖探针涂抹银胶以将金线固定到位。确保没有松散的末端后，将昆虫存根放入泡沫中，直到胶水干燥。

然后轻轻抚摸附着在昆虫短头上的金线，将其塑造成一个长而柔和的弧线，并将金丝修剪成大约 2.5 到 3 厘米长。在解剖显微镜下工作，当金线接触解剖显微镜载物台时，用非惯用手用黄铜钉握住昆虫存根，用惯用手用细尖镊子抓住金丝的最末端，使用细尖镊子将金线的尖端穿过靠近胶合区域的地方昆虫存根的铜丝。然后轻轻拉动昆虫存根，直到金线在细尖镊子周围形成一个小金环。

松开金线并小心地取下镊子。用非惯用手握住昆虫存根的同时，用细尖镊子抓住金环。拉动昆虫短根，同时轻轻旋转镊子远离短根，直到环与金属丝颈部成 90 度角弯曲。

在将昆虫存根放回泡沫块之前，确保金环完全闭合。首先，准备昆虫吸气器和用于蚊子布线的记录电极。将麻醉蚊子仰卧在麻醉垫上，腹部面向研究人员。

放置实验室胶带后，在胶带上滴一滴 0.5 厘米的新鲜混合银胶。然后将麻醉蚊子的腹部吸入吸入器中。使用吸力的时间仅足以使腹部就位，并使用抽吸器将蚊子固定在银胶上方的解剖镜下。

将 minuchin pin 浸入银胶中后，在蚊子的鼻部涂上一层薄薄的一层。将记录电极尖端的金环快速浸入银胶中。将其放在蚊子前缘上的银胶点上，来回摇晃环以确保其齐平。

接下来，以一定角度更换泡沫中的昆虫存根，以便有线蚊子在醒来时能够舒适地站立。一旦连接了所需数量的蚊子，将泡沫块放入储物盒中并进行维护。首先，在电图或 EPG 实验日将记录电极连接到蚊子上。

主机就位后，将头放大器转到一侧。取出有线蚊子后，将昆虫短根的黄铜针插入头放大器上的端口。开始录制 使用硬件管理软件。

将头放大器放在手上方，以便蚊子可以舒适地站立和探测。接地时打开头放大器。根据需要调整主机手部位置，以帮助成功探测。

使用硬件管理软件对记录期间的主机响应、蚊子行为、增益变化和其他相关事件进行带时间戳的观察。使用硬件管理软件调整信号在屏幕上的位置和软件增益，以保持两个信号清晰可见。要调整硬件增益，请将通道翻转一个范围和乘数开关。

如果该调整还不够，请将通道 1 的增益旋钮向右或向左转动，以分别提高或降低增益，以避免峰值过高或不清晰。要调整偏移，请将控制箱上的通道 one offset 开关拨动到 neg。然后将通道旋转一个偏置拨盘，直到计算机屏幕上的前信号和后信号的峰值以相同的方向出现。

如果蚊子在探针的中间，请让它完成。如果在 10 分钟内没有探测，请关闭头部放大器。让宿主小心地移开他们的手，然后用附着的昆虫存根清除蚊子。

最后，更换储物箱中的蚊子。以人手为食的 Culex tarsalis 蚊子的 AC-DC EPG 记录产生了适合分类为科、类型和亚型的可解释波形。