这项工作是支持的玛格丽特M. Alkek基金会RHF。

第1部分：台成立<ol><li>一股潮湿室是放置在塑料商会Kimwipe / DDH 2 O的准备。 </li><li>一个猎鹰管收集白蛋白，文化，戒指，表面玻璃和废物处置的菜都放在替补席上。 </li><li>耐热盘充满生理盐水1.4升（见注释[A]）。 </li></ol>第2部分：胚胎在盐水explanted <ol><li>鸡蛋是从孵化器中删除后16小时（第4阶段）。鸡蛋是由攻壳钳opene。壳牌件被删除。 </li><li>薄白蛋白收集猎鹰管。厚厚的白蛋白是用镊子除去。 </li><li>胚胎被放置在一个塑料盘内的盐水菜。剩下的白蛋白是用镊子除去。 </li></ol>第3部分：环中心的胚胎<ol><li>卵黄囊是用镊子倾斜，使胚胎朝上。 </li><li>卵黄囊是在赤道或以下程度的削减。 </li><li>卵黄膜是用细镊子，迅速去皮。卵黄膜为导向，因此，其颗粒的一面（非光亮）朝上。 </li><li>用细镊子，卵黄膜置于手表玻璃上。 </li><li>用细镊子，玻璃环适用于卵黄膜的顶部，并为中心的胚胎。 </li><li>卵黄膜是解除了周围的玻璃环的边缘。大会是从盐水菜。 </li></ol>第4部分：文化是设置在显微镜下<ol><li>卵黄膜是使用显微镜下细的镊子在玻璃环解除。 </li><li>使用巴斯德吸管，生理盐水从环的外缘。 </li><li>用细剪刀，多余的卵黄膜是从玻璃环的内侧边缘。护理是采取不刺破膜用吸管或镊子。 </li><li>胚胎是轻轻地用生理盐水冲洗，去除松散的膜和卵黄细胞。 </li><li> 200μL生理盐水添加到外缘环（这将有利于以后转让）。 </li><li>大会是覆盖着一个倒置的塑料盘。 </li></ol>第5部分：文化是转移到孵化器<ol><li>一个标记为“猎鹰培养皿。 </li><li>薄血白蛋白2.5毫升添加到猎鹰培养皿的底部。 </li><li> 200μL薄血白蛋白被添加到猎鹰培养皿的盖子内缘。 </li><li>倒菜是从大会。 </li><li>用细镊子，玻璃环下滑沿表玻璃的边缘，并转移到猎鹰菜。 </li><li>所有剩余的生理盐水是从环的内表面。 </li><li>猎鹰盘盖与盖和密封。 </li><li>大会是放置在潮湿的腔，然后在孵化器。 </li><li>胚胎培养24小时，在38 ° C </li></ol>第6部分：文化之后，胚胎是固定的，文化是转移到孵化器<ol><li>如果胚胎是要处理的原位杂交），一个固定的菜充满了冰冷的PBS（或DEPC - PBS。 </li><li>文化是从孵化器中删除，并立即置于冰上。立即充满了冰冷的PBS / DEPC - PBS的培养皿。 </li><li>胚胎从卵黄膜分离。胚胎转移到固定的菜，用巴斯德吸管的钝端。 </li><li>胚胎是使用罚款钳钝端牵制。 PBS覆盖固定盘被删除。固色剂添加（见注[B]）。 </li><li>根据应用，胚胎是固定的6-8小时，在4 °℃（恒温器），O / N在4 ° C（所在地），或在室温下1小时整装免疫组织化学</li><li>固定液用冰冷的PBS / DEPC PBS拆除和更换。 </li><li>对于下游应用原位杂交或immantibody染色，如：神经系统和心脏穿孔使用钝年底microcapillary针或显微切割刀，这将防止探头/抗体被困在后面的步骤。 注释 ：[A]盐水解决方案包括：（1升）：121.0 g氯化钠，氯化钾15.5克，10.4克氯化钙2 .2 H 2 O，12.7克氯化镁2 .6 H 2 O; B液（1升） ：2.4克钠2 HPO 4 .2 H 2 O，0.2克的NaH 2 PO 4 .2 H 2 O;高压灭菌器，在使用之前，混合120毫升与2700毫升H 2 O，加入180毫升乙混合[1]; [B]定影液是在使用前准备（4％PFA在所在地的PBS或DEPC - PBS）。 </li></ol>第7部分：代表结果文化之前，胚胎是在原始连胜阶段（HH4）。在文化时期的结束，胚胎发展到HH10（长2-3毫米），在培养皿的中心可见。标签carbocyanine荧光DII一组单元格，它是可能的前文化（0H），并按照他们的运动，在整个文化时期。在这种情况下，恒胜的节点（HN）以下细胞标记与DII。这些细胞被证明有助于逐步发展的体节（SOM）和脊索（N）。 <img src="/files/ftp_upload/old/903_2008_10_20_2/903_Figure-01.png" alt="" width="780" height="228" />第8部分：故障排除<table style="width: 698px; height: 241px;" border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="698"><tbody><tr><th>问题</th><th>原因</th><th>补救</th></tr><tr><td>胚胎仍然与蛋黄，而不是膜（步骤2） </td><td>卵子质量不佳</td><td>要求新鲜鸡蛋;在收到商店鸡蛋在13 ° C。孵育鸡蛋为入住日期的当天。 </td></tr><tr><td>卵黄膜滑离钟表匠的玻璃环以下的位置（步骤3） </td><td>白蛋白残余</td><td>在第2步，确保所有白蛋白是从膜拉离倾斜钳移除</td></tr><tr><td>胚胎是人迹罕至：位于下方的膜（步骤4） </td><td>膜错误的一边向上</td><td>在第3步，确保含有蛋黄颗粒膜的一侧朝上。的光泽，抛光的一面应朝下。 </td></tr><tr><td>淹没在盐水/白蛋白以下文化的胚胎（步骤6） </td><td>盐水/白蛋白文化前内环左;在膜孔</td><td>在第5步，确保所有白蛋白/生理盐水是从戒指内删除;在第4步，确保你不膜（使用钝结束钳钳皮尔斯） </td></tr><tr><td>胚胎解体以下文化</td><td>细菌感染</td><td>消毒所有的工具和玻璃器皿;使用抗生素/ antimycotic </td></tr></tbody></table>

<ol>
	<li>Pannett, P. A., Compton, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cultivation+of+tissues+in+saline.">The cultivation of tissues in saline.</a> Lancet. 206, 381-384 (1924).</li><li>New, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+the+cultivation+of+the+chick+embryo+in+vitro.">A new technique for the cultivation of the chick embryo in vitro.</a> J. Embryol. Exp. Morph. 3, 326-331 (1955).</li><li>Alvarez, I. S., Araujo, M., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+induction+in+whole+chick+embryo+cultures+by+FGF.">Neural induction in whole chick embryo cultures by FGF.</a> Dev. Biol. 199, 42-54 (1998).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen's+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo.">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fates+and+migratory+routes+of+primitive+streak+cells+in+the+chick+embryo.">Fates and migratory routes of primitive streak cells in the chick embryo.</a> Development. 122, 1523-1534 (1996).</li><li>Voiculescu, O., Papanayotou, C., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+and+temporally+controlled+electroporation+of+early+chick+embryos.">Spatially and temporally controlled electroporation of early chick embryos.</a> Nature Protoc. 3, 419-426 (2008).</li></ol>

一个广泛的应用，从增长因素含珠 3，整个装载在原位杂交和整装免疫组织化学 4移植，可用于新的培养方法2。超过24小时期间的文化，使胚胎发育的连续监测中的应用，如时间的推移细胞运动分析5或绿色荧光蛋白含有电穿孔结构6监测。

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>Animal</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>Premium Fertile</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>MZ9.5 or similar</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Marsh Automatic Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Lyon</td>
<td>RX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Robbins Scientific</td>
<td>M1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pyrex dish (2)</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Watchmaker&#x2019;s glass 50mm</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>66112-060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass rings</td>
<td>Tool</td>
<td>Physical Plant facility</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish.</td>
</tr>
<tr>
<td>Curved Forceps (1)</td>
<td>Surgery</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>72991-4C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (2)</td>
<td>Surgery</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11002-13</td>
<td>blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil</td>
</tr>
<tr>
<td>Sharpening Stone Dan&#x2019;s Black Arkansas</td>
<td>Surgery</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>62082-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine scissors</td>
<td>Surgery</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14161-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic dishes</td>
<td>Tool</td>
<td>Falcon</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber Bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Capillary Pipette</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70950-12</td>
<td>round edge under flame</td>
</tr>
<tr>
<td>Microcapillary tube</td>
<td>Surgery</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1049-1PAK</td>
<td>Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps</td>
</tr>
<tr>
<td>Microdissecting knife</td>
<td>Surgery</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10056-12</td>
<td>Use to puncture cavities prior to in situ hybridization</td>
</tr>
<tr>
<td>Minuten pins 0.2mm diam</td>
<td>Surgery</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>0001986475</td>
<td>Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C</td>
</tr>
<tr>
<td>Diethylpyrocarbonate (depc)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>10025025</td>
<td>Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for culture of early chick embryos ex vivo (new culture)

鸡胚是一个有价值的工具，在早期胚胎发育的研究。其透明度，可获得性和易于操纵，它为研究大脑，神经管，体节和心脏原基的形成和图案的理想工具。鸡胚培养的应用包括电的DNA或RNA的结构，以原位杂交和免疫组织化学分析基因的功能，生长因子，如涂珠FGFs和BMPs的移植，以及整装。本视频演示了在鸡胚培养的不同步骤，首先，胚胎是在生理盐水explanted。然后，胚胎中心的玻璃环上。周围的胚胎膜沿环的墙壁被取消。环，然后放置在文化菜含有白蛋白池。是密封的培养皿中，并放置在潮湿的腔，胚胎培养24小时。最后，胚胎是从环中删除，固定，并为进一步的应用处理。还介绍了故障排除指南。

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Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

本视频演示了新的文化，鸡胚培养24小时以外的鸡蛋的方法。这种方法使研究的早期发展（原始连胜，以14索姆），鼠标E7 - 9对应一个时期。这项技术的应用，包括电，原位杂交和免疫组化。

文化早期鸡胚体外（新文化）的方法

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

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Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

15.5K 次观看.  Institute of Biosciences and Technology - Texas A&M Health Science Center. 本视频演示了新的文化，鸡胚培养24小时以外的鸡蛋的方法。这种方法使研究的早期发展（原始连胜，以14索姆），鼠标E7 - 9对应一个时期。这项技术的应用，包括电，原位杂交和免疫组化。