Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Harvard

&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x3001; &#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x8FDB;&#x5316;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x5728;&#x7EFF;&#x85FB;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x539F;&#x6838;&#x539F;&#x7C4D;&#x5047;&#x5B9A;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x786B;&#x9178; permease &#x63CF;&#x8FF0;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6838;&#x7F16;&#x7801;&#x786B;&#x9178; permease &#x57FA;&#x56E0; (SulP) &#x5305;&#x542B;&#x56DB;&#x4E2A;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#xFF0C;&#x800C;&#x6240;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x786B;&#x9178; permease &#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x548C;&#x7531;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x663E;&#x793A;&#x6269;&#x5C55;&#x7684; N-&#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x5047;&#x5B9A;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x80BD;&#x3002;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5305;&#x542B;&#x4E03;&#x4E2A;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5927;&#x578B;&#x4EB2;&#x6C34;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x539F;&#x6838;&#x8D77;&#x6E90;&#x57FA;&#x56E0;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x5230;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5728;&#x8FDB;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7518;&#x6CB9;&#x9178;&#x3002;SulP &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6216;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4FDD;&#x7559;&#x4E86;&#x5728;&#x7EF4;&#x7BA1;&#x675F;&#x690D;&#x7269;&#xFF0C;&#x5982;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x9047;&#x5230;&#x82D4; (&#x62F3;&#x9175;&#x6BCD;) &#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x8D77;&#x6E90;&#x7684;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x786B;&#x9178; permeases &#x54C1;&#x79CD;&#x4E2D;&#x63D0;&#x4EA4;&#x3002;

SulP&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x5728;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x786B;&#x9178; permease &#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

Genomic, proteomic, phylogenetic and evolutionary aspects of a novel gene encoding a putative chloroplast-targeted sulfate permease of prokaryotic origin in the green alga Chlamydomonas reinhardtii are described. This nuclear-encoded sulfate permease gene (SulP) contains four introns, whereas all other known chloroplast sulfate permease genes lack introns and are encoded by the chloroplast genome. The deduced amino acid sequence of the protein showed an extended N-terminus, which includes a putative chloroplast transit peptide. The mature protein contains seven transmembrane domains and two large hydrophilic loops. This novel prokaryotic-origin gene probably migrated from the chloroplast to the nuclear genome during evolution of C. reinhardtii. The SulP gene, or any of its homologues, has not been retained in vascular plants, e.g. Arabidopsis thaliana, although it is encountered in the chloroplast genome of a liverwort (Marchantia polymorpha). A comparative structural analysis and phylogenetic origin of chloroplast sulfate permeases in a variety of species is presented.

SulP, a nuclear gene encoding a putative chloroplast-targeted sulfate permease in Chlamydomonas reinhardtii.

G&eacute;nomique, prot&eacute;omique, phylog&eacute;niques et &eacute;volutifs des aspects of a novel gene un putatif cibl&eacute;es chloroplastique sulfate perm&eacute;ase d&#39;origine procaryote dans l&#39;algue verte Chlamydomonas reinhardtii sont d&eacute;crites. Ce g&egrave;ne de la perm&eacute;ase sulfate cod&eacute;es (SulP) contient quatre introns, tandis que tous les autres g&egrave;nes chloroplastiques connu sulfate perm&eacute;ase manquent introns et sont cod&eacute;s par le g&eacute;nome chloroplastique. La s&eacute;quence des acides amin&eacute;s de la prot&eacute;ine a montr&eacute; une &eacute;tendue N-terminale, qui comprend un peptide putatif chloroplaste. La prot&eacute;ine mature contient sept domaines transmembranaires et deux larges boucles hydrophiles. Ce nouveau g&egrave;ne procaryote-origine probablement migr&eacute; du chloroplaste au g&eacute;nome nucl&eacute;aire au cours de l&#39;&eacute;volution de c. reinhardtii. Le g&egrave;ne SulP, ou l&#39;un de ses homologues, n&#39;a pas &eacute;t&eacute; retenu dans les plantes vasculaires, par exemple de Arabidopsis thaliana, m&ecirc;me si elle est rencontr&eacute;e dans le g&eacute;nome chloroplastique d&#39;une h&eacute;patique (Marchantia polymorpha). Un comparatif analyse structurale et l&#39;origine phylog&eacute;n&eacute;tique des perm&eacute;ases sulfate chloroplastes dans une vari&eacute;t&eacute; d&#39;esp&egrave;ces est pr&eacute;sent&eacute;e.

SulP, un g&egrave;ne nucl&eacute;aire un putatif cibl&eacute;es chloroplastique sulfate perm&eacute;ase dans Chlamydomonas reinhardtii.

SulP, eine nukleare Gen f&#xFC;r eine putative Chloroplasten gezielter Sulfat-Permease in Chlamydomonas reinhardtii.

Genomica, proteomica, aspetti filogenetici ed evolutivi di un romanzo gene codifica una permeasi putativo mirati cloroplasto solfato di origine procariote il verde alga Chlamydomonas reinhardtii sono descritti. Questo gene permeasi codificati nucleari solfato (SulP) contiene quattro introni, mentre tutti gli altri geni di permeasi solfato cloroplasto noti mancano gli introni e sono codificate dal genoma del cloroplasto. La sequenza dedotta dell&#39;amminoacido della proteina ha mostrato un N-terminus estesa, che comprende un peptide di transito dei cloroplasti putativo. La proteina matura contiene sette domini transmembrana e due grandi cicli idrofilici. Questo romanzo gene procariotico origine probabilmente migrati da cloroplasti al genoma nucleare durante l&#39;evoluzione del c. reinhardtii. Il gene SulP, o uno qualsiasi dei suoi omologhi, &egrave; non stato mantenuto nelle piante vascolari, ad esempio Arabidopsis thaliana, anche se si &egrave; verificato nel genoma del cloroplasto di un liverwort (Marchantia polymorpha). Viene presentata una comparativa analisi strutturale e origine filogenetica di permeases solfato cloroplasto in una variet&agrave; di specie.

SulP, un gene nucleare che codifica una permeasi putativo mirati cloroplasto solfato in Chlamydomonas reinhardtii.

&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3068;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x5074;&#x9762;&#x306F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x786B;&#x9178;&#x900F;&#x904E;&#x9175;&#x7D20;&#x7DD1;&#x85FB;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x786B;&#x9178;&#x900F;&#x904E;&#x9175;&#x7D20;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3053;&#x306E;&#x6838;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x786B;&#x9178;&#x900F;&#x904E;&#x9175;&#x7D20;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (SulP) 4 &#x3064;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x62E1;&#x5F35;&#x306E; N - &#x63A8;&#x5B9A;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x3001;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x306F;&#x3001;7 &#x3064;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x8D77;&#x6E90;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x6838;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3078; C. &#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x4E2D;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3002;&#x82D4;&#x985E; (&#x30BC;&#x30CB;&#x30B4;&#x30B1;) &#x306E;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x906D;&#x9047;&#x3059;&#x308B;&#x304C; SulP &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x7DAD;&#x7BA1;&#x675F;&#x690D;&#x7269;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306F;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x786B;&#x9178; permeases &#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SulP &#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x786B;&#x9178;&#x900F;&#x904E;&#x9175;&#x7D20;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6838;&#x3002;

&#xAC8C;&#xB188;, proteomic, &#xB179;&#xC0C9; &#xC870;&#xB958; Chlamydomonas reinhardtii prokaryotic &#xAE30;&#xC6D0;&#xC758; putative &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xD0C0;&#xAC9F; &#xD669;&#xC0B0; permease &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC18C;&#xC124; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; phylogenetic &#xC9C4;&#xD654; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD575; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD669;&#xC0B0; permease &#xC720;&#xC804;&#xC790; (SulP) &#xD3EC;&#xD568; 4 introns &#xBC18;&#xBA74; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xD669;&#xC0B0; permease &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD80;&#xC871; introns &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD94;&#xB860;&#xB41C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; N-&#xB9D0;&#xB2E8;, &#xC0C1; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xAD50;&#xD1B5; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 7 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xD070; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18C;&#xC124;&#xC758; &#xAE30;&#xC6D0; prokaryotic &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC544;&#xB9C8; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC788;&#xB294; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575; &#xAC8C;&#xB188; C. reinhardtii&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xACFC;&#xC815;. SulP &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xADF8; homologues&#xAC00; &#xB418;&#xC5B4; &#xC720;&#xC9C0; &#xB418;&#xC9C0; &#xD608;&#xAD00; &#xC2DD;&#xBB3C;, &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xBA74; Arabidopsis thaliana liverwort (Marchantia polymorpha)&#xC758; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;. &#xBE44;&#xAD50; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xD669;&#xC0B0; permeases phylogenetic &#xCD9C;&#xCC98; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

SulP, Chlamydomonas reinhardtii&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xD0C0;&#xAC9F; &#xD669;&#xC0B0; permease &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD575; &#xC720;&#xC804;&#xC790;.

Gen&oacute;mica, prote&oacute;mica, aspectos filogen&eacute;ticos y evolutivos de un nuevo gen que codifica una permeasa putativos orientada cloroplasto sulfato de origen procariota en el alga verde Chlamydomonas reinhardtii se describen. Este gen de la permeasa de sulfato nuclear-codificados (SulP) contiene cuatro intrones, mientras que los otros genes de permeasa de sulfato de cloroplasto conocido carecen de intrones y est&aacute;n codificadas por el genoma del cloroplasto. La secuencia de amino&aacute;cidos deducida de la prote&iacute;na mostr&oacute; una extendida N-terminal, que incluye un p&eacute;ptido de tr&aacute;nsito cloroplasto putativos. La prote&iacute;na madura contiene siete dominios transmembrana y dos grandes lazos hidrof&iacute;licos. Este nuevo gen procariotas origen probablemente migraron de cloroplasto el genoma nuclear durante la evoluci&oacute;n de C. reinhardtii. El gen SulP, o cualquiera de sus hom&oacute;logos, no se ha mantenido en las plantas vasculares, por ejemplo de Arabidopsis thaliana, aunque se encuentra en el genoma del cloroplasto de un hep&aacute;ticas (Marchantia polymorpha). Se presenta un an&aacute;lisis comparativo estructural y el origen filogen&eacute;tico de Permeasas sulfato de cloroplasto en una variedad de especies.

SulP, un gen nuclear que codifica una permeasa putativos sulfato cloroplasto orientada en Chlamydomonas reinhardtii.

&#x53CD;&#x4E49;&#x6838;&#x9178;&#x6280;&#x672F;&#x88AB;&#x5E94;&#x7528;&#x5230;&#x7EFF;&#x85FB;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB; reinhardtiito &#x63A2;&#x9488;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x786B;&#x9178; permease (SulP &#xFF1B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x52A0;&#x5165;&#x7F16;&#x53F7; AF467891 &#x548C; AF481828&#xFF09;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;antiSulP &#x690D;&#x682A;&#x4E2D;&#x786B;&#x9178;&#x5438;&#x6536;&#xFF0C;&#x9547;&#x538B;&#x4E2D; SulP &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x800C;&#x53D7;&#x635F;&#x3002;&#x53CD;&#x4E49; antiSulP &#x6297;&#x866B;&#x5C55;&#x51FA;&#x786B;&#x5265;&#x593A;&#x8868;&#x578B;&#x3001; arylsulfatase &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F3A;&#x70C8;&#x611F;&#x5E94;&#x548C;&#x5168;&#x7403;&#x611F;&#x5E94;&#x786B;&#x9178;&#x540C;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5728;&#x5BC6;&#x5C01;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;antiSulP &#x682A;&#x7167;&#x7247;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684; H2&#xFF0C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x7684;&#x786B;&#x9178;&#x5438;&#x6536;&#x9650;&#x5236;&#x6982;&#x5FF5;&#x7684;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#xFF0C;&#x653E;&#x7F13;&#x6C27;&#x8FDB;&#x5316;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5185;&#x90E8;&#x547C;&#x5438;&#x7531;&#x4E8E;&#x538C;&#x6C27;&#x548C;&#x81EA;&#x53D1;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; [Fe]-&#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x83CC;&#x682A;&#x3002;&#x5B83;&#x7ED3;&#x675F; antiSulP &#x83CC;&#x682A;&#x90FD;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x9650;&#x5236;&#x4F9B;&#x5E94;&#x7684;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; H2O &#x6C27;&#x5316;&#x548C; O2 &#x6F14;&#x5316;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;[Fe] &#x672C;&#x6784;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0B;&#x8C03;&#x5BF9;&#x786B;&#x9178;&#x76D0;-&#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x548C;&#x8FDE;&#x7EED; H2-&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x7684;&#x5149;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;antisulPstrains &#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x6B64;&#x7EFF;&#x85FB;&#x6784;&#x538C;&#x6C27;&#x6C27;&#x5149;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x5141;&#x8BB8; H2 &#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

SulP&#xFF0C;&#x6838;&#x7F16;&#x7801;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x786B;&#x9178; permease&#x3001; &#x786B;&#x9178;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x7684; H2 &#x6F14;&#x53D8;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Antisense technology was applied to the green alga Chlamydomonas reinhardtiito probe the function of a novel nuclear gene encoding a chloroplast-envelope localized sulfate permease (SulP; GenBank Accession Numbers AF467891 and AF481828). Analysis showed that antiSulP transformants are impaired in sulfate uptake, a consequence of repression in the SulP gene expression. Antisense antiSulP transformants exhibited a sulfur-deprivation phenotype, strong induction of arylsulfatase activity, and global induction of sulfate assimilation gene expression. In sealed cultures, opposite to the wild-type control, antiSulP strains photo-evolved H2, underlining the notion of sulfate uptake limitation by the chloroplast, a slow-down in the rate of oxygen evolution, establishment of anaerobiosis due to internal respiration and spontaneous expression of the [Fe]-hydrogenase in these strains. It is concluded that antiSulP strains are promising as tools to limit the supply of sulfates to the chloroplast, leading to a down-regulation of H2O-oxidation and O2-evolution activity, to the constitutive expression of the [Fe]-hydrogenase and continuous H2-photoproduction in Chlamydomonas reinhardtii.Thus, antisulPstrains might permit a study of the biochemistry of H2 metabolism in this green alga under constitutive anaerobic oxygenic photosynthesis conditions.

Role of SulP, a nuclear-encoded chloroplast sulfate permease, in sulfate transport and H2 evolution in Chlamydomonas reinhardtii.

La technologie antisens a &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;e &agrave; l&#39;algue verte Chlamydomonas reinhardtiito sonde la fonction d&#39;un g&egrave;ne nucl&eacute;aire codant une perm&eacute;ase de sulfate du chloroplaste-enveloppe localis&eacute;e (SulP ; GenBank Accession les num&eacute;ros AF467891 et AF481828). L&#39;analyse a montr&eacute; qu&#39;antiSulP les transformants sont affaiblies en absorption de sulfate, une cons&eacute;quence de la r&eacute;pression dans l&#39;expression du g&egrave;ne SulP. AntiSulP antisens transformants pr&eacute;sentaient un ph&eacute;notype de soufre-privation, forte induction de l&#39;activit&eacute; de l&#39;arylsulfatase et globale induction de l&#39;expression g&eacute;nique de sulfate assimilation. Dans les cultures scell&eacute;s, en face de la commande de type sauvage, antiSulP souches photo-&eacute;volu&eacute; H2, soulignant la notion de limitation de l&#39;absorption de sulfate par les chloroplastes, un ralentissement du taux d&#39;&eacute;volution de l&#39;oxyg&egrave;ne, mise en place d&#39;ana&eacute;robiose en raison de la respiration interne et une expression spontan&eacute;e de la [Fe]-hydrog&eacute;nase chez ces souches. On en conclut que les souches d&#39;antiSulP sont prometteurs comme outils pour r&eacute;duire l&#39;offre de sulfates de chloroplaste, conduisant &agrave; une r&eacute;gulation &agrave; la baisse d&#39;activit&eacute; H2O-oxydation et &eacute;volution de l&#39;O2, &agrave; l&#39;expression constitutive de la [Fe]-hydrog&eacute;nase et H2-photoproduction continue chez Chlamydomonas reinhardtii.Ainsi, les antisulPstrains pourraient permettre une &eacute;tude de la biochimie du m&eacute;tabolisme H2 dans cette algue verte dans des conditions ana&eacute;robies constitutive de la photosynth&egrave;se oxyg&eacute;nique.

R&ocirc;le du SulP, une perm&eacute;ase de sulfate chloroplastique cod&eacute;es, en transport de sulfate et de d&eacute;gagement de H2 dans Chlamydomonas reinhardtii.

Die Rolle der SulP, ein nuklear kodierten Chloroplasten Sulfat-Permease, in Sulfat-Transport-und H2-Entwicklung in Chlamydomonas reinhardtii.

Tecnologia antisenso &egrave; stata applicata per il verde alga Chlamydomonas reinhardtiito sonda la funzione di un gene nucleare romanzo codifica una permeasi di solfato del cloroplasto-busta localizzata (SulP; GenBank adesione numeri AF467891 e AF481828). L&#39;analisi ha mostrato che transformants antiSulP sono alterati nell&#39;assorbimento del solfato, una conseguenza della repressione dell&#39;espressione del gene SulP. AntiSulP antisenso transformants esposto un fenotipo di zolfo-privazione e forte induzione di attivit&agrave; l&#39;arisulfatasi globale induzione dell&#39;espressione di gene di assimilazione solfato. Nelle culture sigillate, opposta al controllo wild-type, antiSulP ceppi evoluto foto H2, sottolineando la nozione di limite di assorbimento del solfato di cloroplasti, un rallentamento del tasso di evoluzione di ossigeno, istituzione di anaerobiosi a causa della respirazione interna e spontanea espressione del [Fe]-idrogenasi in questi ceppi. Si &egrave; concluso che i ceppi antiSulP sono promettenti come strumenti per limitare il rifornimento di solfati per il cloroplasto, portando ad una down-regulation dell&#39;attivit&agrave; H2O-ossidazione e O2-evoluzione, all&#39;espressione costitutiva del [Fe]-idrogenasi e continuo H2-Bosen in Chlamydomonas reinhardtii.Cos&igrave;, antisulPstrains potrebbe consentire uno studio della biochimica del metabolismo H2 in questa alga verde in condizioni costitutive fotosintesi anaerobica ossigenato.

Ruolo del SulP, una permeasi di solfato cloroplasto nucleare codificato, nel trasporto di solfato e H2 evoluzione in Chlamydomonas reinhardtii.

&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x6280;&#x8853;&#x7DD1;&#x85FB;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; reinhardtiito &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7; &#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x786B;&#x9178;&#x900F;&#x904E;&#x9175;&#x7D20; (SulP; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6838;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GenBank &#x306E;&#x53D7;&#x5165;&#x756A;&#x53F7; AF467891 &#x304A;&#x3088;&#x3073; AF481828)&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; antiSulP transformants &#x786B;&#x9178;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3001;SulP &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; antiSulP transformants &#x786B;&#x9EC4;&#x5265;&#x596A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3001;&#x30A2;&#x30EA;&#x30EB;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x8A98;&#x5C0E;&#x786B;&#x9178;&#x540C;&#x5316;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x5236;&#x5FA1;&#x53CD;&#x5BFE;&#x306E;&#x5BC6;&#x5C01;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6587;&#x5316;&#x3067; antiSulP &#x5199;&#x771F;&#x9032;&#x5316; H2 &#x306E;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x9032;&#x5316;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x547C;&#x5438;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5ACC;&#x6C17;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3068;&#x81EA;&#x767A;&#x8868;&#x73FE; [Fe &#x306F;] &#x306E;&#x7387;&#x306E;&#x6E1B;&#x901F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x786B;&#x9178;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x4E0B;&#x7DDA;&#x7CFB;&#x7D71;-&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x83CC;&#x682A;&#x3067;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;AntiSulP &#x7CFB;&#x7D71;&#x304C; H2O &#x9178;&#x5316;&#x3068; O2 &#x9032;&#x5316;&#x6D3B;&#x52D5;&#x69CB;&#x6210;&#x5F0F; [Fe &#x306F;] &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x306B;&#x786B;&#x9178;&#x5869;&#x306E;&#x4F9B;&#x7D66;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x671B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x9023;&#x7D9A; H2 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;antisulPstrains &#x3053;&#x306E;&#x7DD1;&#x85FB;&#x69CB;&#x6210;&#x306E;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x767A;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x5149;&#x5408;&#x6210;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067; H2 &#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SulP &#x786B;&#x9178;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E; H2 &#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x786B;&#x9178;&#x900F;&#x904E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC13C;&#xC2A4; &#xAE30;&#xC220; &#xB179;&#xC0C9; &#xC870;&#xB958; Chlamydomonas reinhardtiito &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xBD09;&#xD22C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD669;&#xC0B0; permease (SulP; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC18C;&#xC124; &#xD575; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xC740;&#xD589; &#xAC00;&#xC785; &#xBC88;&#xD638; AF467891 &#xBC0F; AF481828). &#xBD84;&#xC11D; &#xADF8; antiSulP transformants &#xD669;&#xC0B0; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;, SulP &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xC560;&#xB294; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC13C;&#xC2A4; antiSulP transformants &#xC720;&#xD669; &#xBD80;&#xC871; &#xD615;, arylsulfatase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD669;&#xC0B0; &#xB3D9;&#xD654; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xBD09;&#xC778;&#xB41C; &#xBB38;&#xD654; antiSulP &#xBCC0;&#xC885; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xC9C4;&#xD654; H2, &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD638;&#xD761;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; anaerobiosis&#xC758; &#xC124;&#xB9BD; &#xBC0F; [&#xCCA0;]&#xC758; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18D;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xD669;&#xC0B0; &#xAE00;&#xADC0; &#xD55C;&#xACC4;&#xC758; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xBC11;&#xC904;-hydrogenase &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0;. AntiSulP &#xC885;&#xC790;&#xB294; [&#xCCA0;]&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xC2DD; &#xBB3C; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; o 2 &#xC9C4;&#xD654; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC120;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD669;&#xC0B0;&#xC758; &#xACF5;&#xAE09;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xCCB4;&#xACB0;-hydrogenase &#xBC0F; &#xC5F0;&#xC18D; H2-photoproduction Chlamydomonas reinhardtii&#xC5D0;.&#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, antisulPstrains oxygenic &#xAD11;&#xD569;&#xC131; &#xC81C;&#xC815; &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC0C9; &#xC870;&#xB958;&#xAC00;&#xC5D0; H2 &#xB300;&#xC0AC;&#xC758; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

SulP, &#xD669;&#xC0B0; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; Chlamydomonas reinhardtii&#xC5D0;&#xC11C; h 2 &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xD575; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD669;&#xC0B0; permease&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Tecnolog&iacute;a antisentido se aplic&oacute; a la alga verde Chlamydomonas reinhardtiito sonda la funci&oacute;n de un gen nuclear novela que codifica una permeasa de sulfato de sobres cloroplasto localizada (SulP; Adhesi&oacute;n de GenBank n&uacute;meros AF467891 y AF481828). El an&aacute;lisis demostr&oacute; antiSulP transformantes se deterioran en la absorci&oacute;n de sulfato, una consecuencia de la represi&oacute;n en la expresi&oacute;n del gen SulP. AntiSulP antisentido transformantes exhibieron un fenotipo de azufre-privaci&oacute;n, fuerte inducci&oacute;n de la actividad de la arilsulfatasa y global inducci&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de sulfato asimilaci&oacute;n. En las culturas selladas, frente al control de tipo salvaje, antiSulP cepas H2 foto-evolucionado, subrayando la idea de limitaci&oacute;n de la absorci&oacute;n de sulfato por el cloroplasto, una desaceleraci&oacute;n en el ritmo de evoluci&oacute;n de ox&iacute;geno, establecimiento de anaerobiosis debido a la respiraci&oacute;n interna y la expresi&oacute;n espont&aacute;nea de la [Fe]-hidrogenasa en estas cepas. Se concluye que las cepas de antiSulP son prometedoras como herramientas para limitar el suministro de sulfatos en el cloroplasto, llevando a una baja regulaci&oacute;n de la actividad de la oxidaci&oacute;n de H2O y O2-evoluci&oacute;n, a la expresi&oacute;n constitutiva de la [Fe]-hidrogenasa y H2-photoproduction continua en Chlamydomonas reinhardtii.As&iacute;, antisulPstrains podr&iacute;a permitir un estudio de la bioqu&iacute;mica del metabolismo de H2 en este alga verde bajo condiciones oxig&eacute;nicas anaerobio constitutiva de la fotos&iacute;ntesis.

Papel de SulP, una permeasa de sulfato de nuclear-codificados cloroplasto, en transporte de sulfato y la evoluci&oacute;n de H2 en Chlamydomonas reinhardtii.

&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A; Rab &#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;Rab3a &#x548C; Rab5a&#xFF0C;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6D77;&#x9A6C;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x7A81;&#x89E6;&#x6D3B;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4; Rab3a &#x8131;&#x79BB;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x548C;&#x5206;&#x6563;&#x5230;&#x90BB;&#x8FD1;&#x7684;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x5206;&#x6563;&#x6240;&#x9700;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x80DE;&#x548C;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E4B;&#x524D;&#x6574;&#x4E2A;&#x6CE1;&#x6C60;&#x7FFB;&#x4E86;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4EA7;&#x751F;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x5206;&#x6563;&#x7684; Rab5a&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x7F3A;&#x5931;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;Rab3a &#xFF08;Q81L&#xFF09;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Rab3a &#x6162;&#x5206;&#x6563;&#x548C;&#x4E0B;&#x964D;&#x7387;&#x7684;&#x80DE;&#x548C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x56DE;&#x6536;&#x6C60;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x867D;&#x7136; Rab3a &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;Rab5a &#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11; 50%&#x56DE;&#x6536;&#x6C60;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x867D;&#x7136; Rab3a &#x4F18;&#x5148;&#x56DE;&#x6536;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8C03;&#x8282;&#x5176;&#x8D29;&#x8FD0;&#xFF0C;Rab5a &#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x6392;&#x9664;&#x56DE;&#x6536;&#x6C34;&#x6CE1;&#x3002;

Rab3a &#x548C; Rab5a &#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7A81;&#x89E6;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

We investigated the roles of two Rab-family proteins, Rab3a and Rab5a, in hippocampal synaptic transmission using real-time fluorescence imaging. During synaptic activity, Rab3a dissociated from synaptic vesicles and dispersed into neighbouring axonal regions. Dispersion required calcium-dependent exocytosis and was complete before the entire vesicle pool turned over. In contrast, even prolonged synaptic activity produced limited dispersion of Rab5a. A GTPase-deficient mutant, Rab3a (Q81L), dispersed more slowly than wild-type Rab3a, and decreased the rate of exocytosis and the size of the recycling pool of vesicles. While overexpression of Rab3a did not affect vesicle recycling, overexpression of Rab5a reduced the recycling pool size by 50%. We propose that while Rab3a preferentially associates with recycling synaptic vesicles and modulates their trafficking, Rab5a is largely excluded from recycling vesicles.

Real-time imaging of Rab3a and Rab5a reveals differential roles in presynaptic function.

Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; les r&#xF4;les des deux Rab-famille des prot&#xE9;ines, et Rab3A Rab5a, dans la transmission synaptique hippocampique en utilisant en temps r&#xE9;el l&#x26;#39;imagerie de fluorescence. Au cours de l&#x26;#39;activit&#xE9; synaptique, dissoci&#xE9;e de v&#xE9;sicules synaptiques et Rab3A dispers&#xE9;s dans les r&#xE9;gions voisines axonales. Dispersion n&#xE9;cessaire d&#xE9;pendant du calcium et l&#x26;#39;exocytose est termin&#xE9; avant la piscine v&#xE9;sicule toute retourn&#xE9;e. En revanche, m&#xEA;me une activit&#xE9; prolong&#xE9;e synaptique produit une dispersion limit&#xE9;e des Rab5a. Un mutant d&#xE9;ficient en GTPase, Rab3A (Q81L), dispers&#xE9; plus lentement que de type sauvage Rab3A, et une diminution de la vitesse de l&#x26;#39;exocytose et la taille du pool de recyclage de v&#xE9;sicules. Alors que la surexpression de Rab3A n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;incidence sur le recyclage des v&#xE9;sicules, la surexpression de Rab5a r&#xE9;duit la taille du pool de recyclage de 50%. Nous proposons que tout Rab3A pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement associ&#xE9;s avec le recyclage des v&#xE9;sicules synaptiques et module leur trafic, Rab5a est en grande partie exclus de v&#xE9;sicules de recyclage.

Imagerie en temps r&#xE9;el des Rab3A et Rab5a r&#xE9;v&#xE8;le les r&#xF4;les diff&#xE9;rentiels en fonction pr&#xE9;synaptique

Wir untersuchten die Rollen zweier Rab-Familie Proteine, Rab3a und Rab5a, in hippocampal synaptischen &Uuml;bertragung mit Echtzeit-Fluoreszenz-Bildgebung. W&auml;hrend der synaptischen Aktivit&auml;t Rab3a distanzierte von synaptische Vesikel und verstreuten zu axonale Nachbarregionen. Dispersion ben&ouml;tigt Kalzium-abh&auml;ngige Exozytose und war abgeschlossen, bevor der gesamte Vesikel-Pool &uuml;bergab. Im Gegensatz dazu produziert sogar verl&auml;ngerte synaptische Aktivit&auml;t begrenzt Streuung der Rab5a. Ein GTPase-defizienten Mutant, Rab3a (Q81L), langsamer als Wildtyp Rab3a verteilt und sank die Rate der Exozytose und die Gr&ouml;&szlig;e der Wiederverwertung Pool der Bl&auml;schen. W&auml;hrend eine &Uuml;berexpression von Rab3a Vesikel, die Wiederverwertung nicht ausgewirkt hat, reduziert eine &Uuml;berexpression von Rab5a die Wiederverwertung Poolgr&ouml;&szlig;e um 50 %. Wir schlagen vor, w&auml;hrend Rab3a bevorzugt associates mit recycling synaptische Vesikel und moduliert, ihren Handel, Rab5a jedoch weitgehend ausgeschlossen ist aus dem recycling von Vesikeln.

Echtzeit Rab3a und Rab5a offenbart differenzielle Rollen in pr&auml;synaptische Funktion.

Abbiamo studiato i ruoli di due proteine Rab-famiglia, Rab3a e Rab5a, nella trasmissione sinaptica hippocampal utilizzando immagini di fluorescenza in tempo reale. Durante l&#39;attivit&agrave; sinaptica, Rab3a dissociato dalle vescicole sinaptiche e disperse in assonale nelle regioni limitrofe. Dispersione necessaria esocitosi calcio-dipendente e fu completato prima che la piscina intera vescicola capovolta. In contrasto, anche prolungata attivit&agrave; sinaptica prodotto limitata dispersione di Rab5a. Un mutante di GTPase-carenti, Rab3a (Q81L), disperso pi&ugrave; lentamente di Rab3a wild-type e diminuito il tasso di esocitosi e la dimensione del pool riciclaggio delle vescicole. Mentre la sovraespressione di Rab3a non influisce sulla vescicola riciclaggio, sovraespressione di Rab5a ridotto le dimensioni del pool di riciclaggio del 50%. Proponiamo che mentre Rab3a preferenzialmente associa riciclaggio vescicole sinaptiche e modula il loro traffico, Rab5a &egrave; in gran parte escluse dal riciclaggio vescicole.

Immagini in tempo reale di Rab3a e Rab5a rivela ruoli differenziali in funzione presinaptica.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6D77;&#x99AC;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x3067;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;Rab&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;Rab3a&#x3068;Rab5a&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x3001;Rab3a&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8FD1;&#x96A3;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3002;&#x5206;&#x6563;&#x6DB2;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x5F15;&#x304D;&#x6E21;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;Rab5a&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x6563;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6B20;&#x640D;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;Rab3a&#xFF08;Q81L&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;Rab3a&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3068;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3068;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#xB7;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; Rab3a&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;Rab5a&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;50&#xFF05;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#xB7;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9593;&#x306B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;Rab3a&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;Rab5a&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x9664;&#x5916;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

Rab3a&#x3068;Rab5a&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5FAE;&#x5206;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xB7A9; &#xAC00;&#xC871; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Rab3a &#xBC0F; Rab5a, hippocampal &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC911; Rab3a &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC;&#xC640; &#xC774;&#xC6C3; axonal &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC0B0;. &#xBD84;&#xC0B0; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; exocytosis&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE30; &#xD480; &#xC778;&#xACC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xC644;&#xB8CC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;,&#xB3C4; &#xC7A5;&#xAE30; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xBD84;&#xC0B0; rab5a&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;. GTPase &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, Rab3a (Q81L) &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Rab3a &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB290;&#xB9AC;&#xAC8C; &#xBD84;&#xC0B0; &#xBC0F; exocytosis &#xBE44;&#xC728;&#xACFC; vesicles&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD480;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C;. Rab3a&#xC758; overexpression&#xB294; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAE30;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; rab5a&#xC758; overexpression &#xC7AC;&#xC0DD; &#xD480; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; 50% &#xAC10;&#xC18C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xB3D9;&#xC548; rab3a&#xB294; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBC00;&#xB9E4; &#xBCC0;&#xC870;, Rab5a &#xC8FC;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Rab3a &#xBC0F; rab5a&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; presynaptic &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Hemos investigado el papel de la familia Rab-dos prote&#xED;nas, Rab3a y Rab5a, en la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica del hipocampo en tiempo real mediante im&#xE1;genes de fluorescencia. Durante la actividad sin&#xE1;ptica, disociada de las ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas y Rab3a dispersa en las regiones vecinas axonal. La dispersi&#xF3;n se requiere de calcio dependientes de la exocitosis y se complet&#xF3; antes de que la piscina de la ves&#xED;cula toda la vuelta. Por el contrario, incluso la actividad sin&#xE1;ptica prolongada produce una dispersi&#xF3;n limitada de Rab5a. Un mutante deficiente en GTPasa, Rab3a (Q81L), dispersa m&#xE1;s lentamente que de tipo salvaje Rab3a, y la disminuci&#xF3;n de la tasa de exocitosis y el tama&#xF1;o de la piscina de reciclaje de las ves&#xED;culas. Mientras que la sobreexpresi&#xF3;n de Rab3a no afect&#xF3; reciclaje de ves&#xED;culas, la sobreexpresi&#xF3;n de Rab5a reducido el tama&#xF1;o del grupo de reciclaje en un 50%. Proponemos que, si bien Rab3a preferentemente asociados con el reciclaje de las ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas y modula su tr&#xE1;fico, Rab5a es en gran medida excluidos de las ves&#xED;culas de reciclaje.

Im&#xE1;genes en tiempo real de Rab3a y Rab5a revela diferentes roles en la funci&#xF3;n presin&#xE1;ptica

&#x7EF4;&#x6301;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x64AD;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5FEB;&#x901F;&#x56DE;&#x6536;&#x542B;&#x53D8;&#x9001;&#x5668;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x3002;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; dynamin &#x4ECB;&#x5BFC;&#x68C0;&#x7D22;&#x7684;&#x6C34;&#x6CE1;&#x819C;&#x5DF2;&#x65E0;&#x53EF;&#x4E89;&#x8BAE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x4E5F;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EA4;&#x901A;&#x5DE5;&#x5177;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x68C0;&#x7D22;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6279;&#x91CF;&#x68C0;&#x7D22;&#x548C;&#x6240;&#x8C13;&#x7684;&#x543B;&#x8FD0;&#x884C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x518D;&#x7528;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x662F;&#x5426;&#x5728; dynamin &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5176;&#x4ED6;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5; dynamin &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5185;&#x541E;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x79F0;&#x4E3A; dynasore&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x8FC5;&#x901F;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; dynamin &#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x5185;&#x7684;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6301;&#x4E45;&#x6216;&#x77ED;&#x6682;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x5B8C;&#x5168;&#x548C;&#x53EF;&#x9006;&#x963B;&#x6B62;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x8FBE;&#x8367;&#x5149;&#x793A;&#x8E2A;&#x5242; synaptopHluorin dynasore &#x7684;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;dynasore &#x5DF2;&#x7ECF;&#x5BF9;&#x80DE;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E0B; dynasore&#xFF0C;&#x4F4E;&#x9891;&#x523A;&#x6FC0;&#x5BFC;&#x81F4; synaptopHluorin &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6C34;&#x6CE1;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x79EF;&#x7D2F;&#x901F;&#x7387;&#x9884;&#x6D4B;&#x4ECE;&#x51C0;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x3002;&#x751A;&#x81F3;&#x540E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BA1;&#x5212;&#x88AB;&#x7EC8;&#x6B62;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x541E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x4F4E;&#x9891;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E4B;&#x540E;&#x5B83;&#x7684;&#x65F6;&#x671F;&#x4F9D;&#x9760; dynamin&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6C34;&#x6CE1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7559;&#x5728;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x819C;&#x4E0A;&#x3002;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x548C;&#x541E;&#x53EA;&#x5728; dynasore &#x4E0B;&#x88AB;&#x6FC0;&#x53D1;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;dynamin &#x5BF9;&#x4E8E;&#x6240;&#x6709;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x8865;&#x507F;&#x6027;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5185;&#x541E;&#x5305;&#x62EC;&#x4EFB;&#x4F55;&#x543B;&#x8FD0;&#x884C;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

Dynamin &#x6291;&#x5236;&#x5B8C;&#x5168;&#x963B;&#x6B62;&#x8865;&#x507F;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5185;&#x541E;&#x3002;

The ability of synapses to sustain signal propagation relies on rapid recycling of transmitter-containing presynaptic vesicles. Clathrin- and dynamin-mediated retrieval of vesicular membrane has an undisputed role in synaptic vesicle recycling. There is also evidence for other modes of vesicle retrieval, including bulk retrieval and the so-called kiss-and-run recycling. Whether dynamin in required for these other modes of synaptic vesicle endocytosis remains unclear. Here, we have tested the role of dynamin in synaptic vesicle endocytosis by using a small molecule called dynasore, which rapidly inhibits the GTPase activity of dynamin with high specificity. Endocytosis after sustained or brief stimuli was completely and reversibly blocked by dynasore in cultured hippocampal neurons expressing the fluorescent tracer synaptopHluorin. By contrast, dynasore had no effect on exocytosis. In the presence of dynasore, low-frequency stimulation led to sustained accumulation of synaptopHluorin and other vesicular proteins on the surface membrane at a rate predicted from net exocytosis. These vesicular components remained on surface membranes even after the stimulus was terminated, suggesting that all endocytic events rely on dynamin during low-frequency activity as well as in the period after it. Ultrastructural analysis revealed a reduction in the density of synaptic vesicles and the presence of endocytic structures only at synapses that were stimulated in the presence of dynasore. In sum, our data indicate that dynamin is essential for all forms of compensatory synaptic vesicle endocytosis including any kiss-and-run events.

Inhibition of dynamin completely blocks compensatory synaptic vesicle endocytosis.

La capacit&#xE9; des synapses &#xE0; soutenir la propagation du signal repose sur le recyclage rapide des &#xE9;metteurs-contenant des v&#xE9;sicules pr&#xE9;synaptiques. La r&#xE9;cup&#xE9;ration de la clathrine et la dynamine-m&#xE9;diation de la membrane v&#xE9;siculaire a un r&#xF4;le incontest&#xE9; dans le recyclage des v&#xE9;sicules synaptiques. Il existe &#xE9;galement des preuves pour les autres modes de r&#xE9;cup&#xE9;ration des v&#xE9;sicules, y compris la r&#xE9;cup&#xE9;ration en vrac et le soi-disant baiser-and-run de recyclage. Que ce soit dans la dynamine requis pour ces autres modes de endocytose des v&#xE9;sicules synaptiques reste incertaine. Ici, nous avons test&#xE9; le r&#xF4;le de la dynamine dans l&#x26;#39;endocytose des v&#xE9;sicules synaptiques en utilisant une petite mol&#xE9;cule appel&#xE9;e dynasore, qui inhibe rapidement l&#x26;#39;activit&#xE9; GTPase de la dynamine avec une grande sp&#xE9;cificit&#xE9;. Endocytose apr&#xE8;s stimuli soutenus ou de courte dur&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; compl&#xE8;tement et de fa&#xE7;on r&#xE9;versible bloqu&#xE9; par dynasore dans des cultures de neurones de l&#x26;#39;hippocampe exprimant le traceur fluorescent synaptopHluorin. En revanche, dynasore eu aucun effet sur l&#x26;#39;exocytose. En pr&#xE9;sence de dynasore, &#xE0; faible fr&#xE9;quence de stimulation conduit &#xE0; l&#x26;#39;accumulation soutenue des synaptopHluorin et d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines v&#xE9;siculaires sur la membrane de surface &#xE0; un taux pr&#xE9;vu de l&#x26;#39;exocytose nette. Ces composants v&#xE9;siculaires est rest&#xE9; sur les membranes de surface, m&#xEA;me apr&#xE8;s que le stimulus a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;sili&#xE9;, ce qui sugg&#xE8;re que tous les &#xE9;v&#xE9;nements d&#x26;#39;endocytose s&#x26;#39;appuyer sur la dynamine au cours de basse fr&#xE9;quence d&#x26;#39;activit&#xE9; ainsi que dans la p&#xE9;riode apr&#xE8;s. L&#x26;#39;analyse ultrastructurale a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une r&#xE9;duction de la densit&#xE9; des v&#xE9;sicules synaptiques et la pr&#xE9;sence de structures d&#x26;#39;endocytose seulement au niveau des synapses qui ont &#xE9;t&#xE9; stimul&#xE9;es en pr&#xE9;sence de dynasore. En somme, nos donn&#xE9;es indiquent que la dynamine est essentielle pour toutes les formes de l&#x26;#39;endocytose des v&#xE9;sicules synaptiques compensatoire, y compris les &#xE9;v&#xE9;nements baiser-and-run.

L&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;endocytose Dynamin bloque compl&#xE8;tement compensatoire des v&#xE9;sicules synaptiques

Die F&auml;higkeit von Synapsen, Signal Propagation aufrechtzuerhalten st&uuml;tzt sich auf die schnelle recycling von Sender-haltigen pr&auml;synaptischen Vesikeln. Clathrin - und Dynamin-vermittelter Abruf der vesikul&auml;ren Membran hat eine unangefochtene Rolle synaptische Vesikel Recycling. Es gibt auch Hinweise f&uuml;r andere Verkehrstr&auml;ger Vesikel abrufen, einschlie&szlig;lich Massen abrufen und das so genannte Kuss-und-Run-recycling. Synaptische Vesikel Endozytose bleibt unklar, ob Dynamin in f&uuml;r diese anderen Verkehrstr&auml;gern erforderlich ist. Hier haben wir die Rolle des Dynamin in synaptische Vesikel Endozytose getestet, mit ein kleines Molek&uuml;l namens Dynasore, das schnell die GTPase-Aktivit&auml;t von Dynamin mit hoher Spezifit&auml;t hemmt. Endozytose nach nachhaltige oder kurze Reize wurde komplett und umkehrbar durch Dynasore in kultivierten Neuronen, die Ausdruck der Fluoreszenz Tracer SynaptopHluorin blockiert. Im Gegensatz dazu hatte die Dynasore keine Auswirkung auf die Exozytose. In Anwesenheit von Dynasore f&uuml;hrte niederfrequente Stimulation zur nachhaltigen Ansammlung von SynaptopHluorin und andere vesikul&auml;re Proteine auf der Oberfl&auml;che Membran mit einer Rate von net-Exozytose vorhergesagt. Diese vesikul&auml;ren Komponenten blieb auf der Oberfl&auml;che Membranen selbst, nachdem der Reiz beendet wurde, was darauf hindeutet, dass alle endocytic Ereignisse auf Dynamin w&auml;hrend Niederfrequenz-Aktivit&auml;t ebenso wie in der Zeit nach es verlassen. Ultrastrukturelle Analyse ergab eine Verringerung der Dichte von synaptischen Bl&auml;schen und das Vorhandensein von endocytic Strukturen nur auf Synapsen, die in Gegenwart von Dynasore gef&ouml;rdert wurden. In der Summe hindeuten unsere Daten, dass Dynamin notwendig f&uuml;r alle Formen der kompensatorischen synaptische Vesikel Endozytose einschlie&szlig;lich alle Kuss-und-Run-Ereignisse.

Hemmung der Dynamin blockiert vollst&auml;ndig kompensatorische synaptische Vesikel Endozytose.

La capacit&agrave; di sinapsi per sostenere la propagazione del segnale si basa sul riciclo rapido del trasmettitore-contenente le vescicole presinaptiche. Mediata da clatrina e dynamin recupero della membrana vescicolare ha un ruolo indiscusso nel riciclaggio della vescicola sinaptica. C&#39;&egrave; inoltre la prova per altre modalit&agrave; di recupero della vescicola, compreso il cosiddetto bacio e conduzione riciclaggio e il recupero di massa. Se dynamin nella necessaria per queste altre modalit&agrave; di endocitosi Vescicola sinaptica rimane poco chiaro. Qui, abbiamo testato il ruolo di dynamin nell&#39;endocitosi Vescicola sinaptica utilizzando una piccola molecola chiamata dynasore, che rapidamente inibisce l&#39;attivit&agrave; di GTPase di dynamin con elevata specificit&agrave;. Endocitosi dopo stimoli sostenute o breve era bloccato completamente e reversibilmente da dynasore in neuroni ippocampali colti esprimendo il tracciante fluorescente synaptopHluorin. Al contrario, dynasore ha avuto alcun effetto sull&#39;esocitosi. In presenza di dynasore, stimolazione a bassa frequenza ha portato al continuo accumulo di synaptopHluorin e di altre proteine vescicolari sulla membrana superficiale ad un tasso previsto da esocitosi netto. Questi componenti vescicolari &egrave; rimasto sulla superficie delle membrane anche dopo che &egrave; stato terminato lo stimolo, suggerendo che tutti gli eventi endocitico si basano su dynamin durante l&#39;attivit&agrave; di bassa frequenza cos&igrave; come il periodo dopo di esso. L&#39;analisi ultrastrutturale ha rivelato una riduzione della densit&agrave; delle vescicole sinaptiche e la presenza di strutture endocitico solo alle sinapsi che sono stati stimolati in presenza di dynasore. In somma, i nostri dati indicano che dynamin &egrave; essenziale per tutte le forme di endocitosi compensativo Vescicola sinaptica tra cui qualche bacio e conduzione eventi.

Inibizione di dynamin blocca completamente endocitosi compensativo Vescicola sinaptica.

&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x642C;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x9001;&#x4FE1;&#x6A5F;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6C34;&#x75B1;&#x819C;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x5A92;&#x4ECB;&#x691C;&#x7D22;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x4F59;&#x5730;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x62EC;&#x691C;&#x7D22;&#x3001;&#x3044;&#x308F;&#x3086;&#x308B;&#x30AD;&#x30B9;&#xB7;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#xB7;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3082;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;dynasore&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;synaptopHluorin&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x57F9;&#x990A;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;dynasore&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;dynasore&#x306F;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; dynasore&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x4E0A;&#x306E;synaptopHluorin&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x4F4E;&#x5468;&#x6CE2;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x4F4E;&#x5468;&#x6CE2;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4E2D;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x964D;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3067;&#x3082;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3060;&#x3051;dynasore&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30AD;&#x30B9;&#xB7;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#xB7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EE3;&#x511F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xD30C;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; presynaptic vesicles &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xB9C9;&#xC758; Clathrin dynamin &#xC911;&#xC7AC; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xB300;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB4F1; &#xC774;&#xB978;&#xBC14; &#xD0A4;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD589; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAE30; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dynamin&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; endocytosis &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; dynamin GTPase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; dynasore &#xB77C;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; endocytosis&#xC5D0; dynamin&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xB610;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xC790;&#xADF9; &#xD6C4; endocytosis &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xACE0; &#xC5ED; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB41C; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; hippocampal &#xC2E0;&#xACBD; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xAD11; &#xCD94;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; Synaptophluorin&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; dynasore&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, dynasore&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; exocytosis &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dynasore, &#xC874;&#xC7AC;-&#xC800;&#xC8FC;&#xD30C; &#xC790;&#xADF9; net exocytosis&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C9;&#xC5D0; synaptopHluorin &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBAA8;&#xB4E0; endocytic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xD6C4; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC911; dynamin&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xADF9; &#xC885;&#xB8CC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. Ultrastructural &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC640; dynasore&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC790;&#xADF9; &#xD588;&#xB2E4; &#xB0C5; &#xC2DC;&#xC5D0;&#xB9CC; endocytic &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xBC00;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xD45C;. &#xC694;&#xCEE8;&#xB300;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; dynamin &#xBCF4;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; endocytosis &#xD0A4;&#xC2A4;-&#xC2E4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Dynamin&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; endocytosis&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La capacidad de sinapsis para mantener la propagaci&#xF3;n de la se&#xF1;al se basa en el reciclaje r&#xE1;pido de transmisor que contienen ves&#xED;culas presin&#xE1;pticas. Recuperaci&#xF3;n de clatrina y dynamin mediada por la membrana vesicular tiene un papel indiscutible en el reciclaje de las ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas. Tambi&#xE9;n hay evidencia de otras formas de recuperaci&#xF3;n de la ves&#xED;cula, incluyendo la recuperaci&#xF3;n de volumen y el reciclaje llamado beso a la fuga. Ya sea en el dynamin requerida para estos otros modos de endocitosis de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas sigue sin estar claro. En este caso, hemos probado el papel de la dynamin en la endocitosis de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas mediante el uso de una peque&#xF1;a mol&#xE9;cula llamada dynasore, que r&#xE1;pidamente se inhibe la actividad GTPasa de la dynamin con alta especificidad. La endocitosis despu&#xE9;s de los est&#xED;mulos constantes o breve fue completamente reversible y bloqueado por dynasore en cultivos de neuronas del hipocampo que expresan el marcador fluorescente synaptopHluorin. Por el contrario, dynasore tuvo ning&#xFA;n efecto sobre la exocitosis. En presencia de dynasore, la estimulaci&#xF3;n de baja frecuencia condujo a la acumulaci&#xF3;n sostenida de synaptopHluorin y otras prote&#xED;nas vesiculares en la membrana de superficie a una velocidad de predecir a partir de exocitosis neto. Estos componentes vesiculares se mantuvo en las membranas de superficie incluso despu&#xE9;s del est&#xED;mulo se dio por terminado, lo que sugiere que todos los eventos endoc&#xED;tica confiar en dynamin durante la actividad de baja frecuencia, as&#xED; como en el per&#xED;odo despu&#xE9;s de ella. El an&#xE1;lisis ultraestructural revel&#xF3; una reducci&#xF3;n en la densidad de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas y la presencia de estructuras endoc&#xED;tica s&#xF3;lo en las sinapsis que se estimularon en presencia de dynasore. En resumen, nuestros datos indican que dynamin es esencial para todas las formas de endocitosis compensatoria ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas incluyendo los eventos de toque y de ejecuci&#xF3;n.

La inhibici&#xF3;n de la Dynamin bloquea completamente compensatorio endocitosis de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas

In many mammals, body weight increases continuously throughout adulthood until late middle age. The hormone leptin is necessary for maintaining body weight, in that high levels of leptin promote negative energy balance. As animals age, however, their increase in body weight is accompanied by a steady rise in circulating leptin levels, indicating the progressive development of counterregulatory mechanisms to antagonize leptin's anorexigenic effects. Hypothalamic neurons coexpressing agouti-related peptide (AgRP) and neuropeptide Y are direct leptin targets. These neurons promote positive energy balance, and they inhibit anorexigenic proopiomelanocortin (POMC) neurons via direct neuropeptide action and release of γ-aminobutyric acid. We show here that AgRP and neuropeptide Y innvervation onto POMC neurons increases dramatically with age in male mice. This is associated with progressive increase of inhibitory postsynaptic currents and decrease of POMC firing rate with age. Neuronal activity is significantly attenuated in POMC neurons that receive a high density of AgRP puncta. These high-density AgRP inputs correlate with leptin levels in normal mice and are nearly absent in mice lacking leptin. The progression of increased AgRP innervation onto POMC somas is accelerated in hyperleptinemic, diet-induced obese mice. Together our study suggests that modulation of hypothalamic AgRP innervation constitutes one mechanism to counter the effects of the age-associated rise in leptin levels, thus sustaining body weight and fat mass at an elevated level in adulthood.

Jamila Newton

Department of Molecular and Cell Biology

Harvard

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

Jamila Newton

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Harvard

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

Department of Molecular and Cell Biology