Organotypic Hippocampal Slice Cultures

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

University of Washington School of Medicine

&#x5F53;&#x524D;&#x89C6;&#x56FE;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#xFF0C;&#x5982; DNA &#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x87AF;&#x5408;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x6740;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5728;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7EC4;&#x88C5;&#x76F4;&#x63A5; &#xFF1B; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x5728;&#x8FD9;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x901A;&#x8FC7;&#x653E;&#x5927;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5FEB;&#x4E86;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x5E94;&#x529B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-2 &#x548C;&#x8FD9;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;&#x80C1;&#x8FEB;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x5728;&#x653E;&#x5927;&#x5668;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x542F;&#x52A8;&#x5668;&#x5728;&#x6982;&#x5FF5;&#x4E0A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x9014;&#x5F84;&#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;

&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x524D;&#x5E94;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-2 &#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;

A current view is that cytotoxic stress, such as DNA damage, induces apoptosis by regulating the permeability of mitochondria. Mitochondria sequester several proteins that, if released, kill by activating caspases, the proteases that disassemble the cell. Cytokines activate caspases in a different way, by assembling receptor complexes that activate caspases directly; in this case, the subsequent mitochondrial permeabilization accelerates cell disassembly by amplifying caspase activity. We found that cytotoxic stress causes activation of caspase-2, and that this caspase is required for the permeabilization of mitochondria. Therefore, we argue that cytokine-induced and stress-induced apoptosis act through conceptually similar pathways in which mitochondria are amplifiers of caspase activity rather than initiators of caspase activation.

Requirement for caspase-2 in stress-induced apoptosis before mitochondrial permeabilization.

Un affichage actuel est que le stress cytotoxique, tels que les dommages &agrave; l&#39;ADN, induit l&#39;apoptose par r&eacute;gulation de la perm&eacute;abilit&eacute; des mitochondries. Mitochondries s&eacute;questrent plusieurs prot&eacute;ines qui, s&#39;il est rejet&eacute;, tuent par l&#39;activation des caspases, les prot&eacute;ases qui d&eacute;monter la cellule. Cytokines activer des caspases dans une mani&egrave;re diff&eacute;rente, en assemblant des complexes de r&eacute;cepteurs qui activent des caspases directement ; dans ce cas, la perm&eacute;abilisation mitochondriale subs&eacute;quente acc&eacute;l&egrave;re le d&eacute;montage de la cellule en amplifiant l&#39;activit&eacute; de la caspase. Nous avons trouv&eacute; que cytotoxique stress provoque l&#39;activation de la caspase-2, et qu&#39;il faut ce caspase pour la perm&eacute;abilisation de mitochondries. Par cons&eacute;quent, nous soutenons qu&#39;induite par les cytokines et l&#39;apoptose induite par le stress agisse par l&#39;interm&eacute;diaire de voies conceptuellement semblables dans lesquels les mitochondries sont des amplificateurs de l&#39;activit&eacute; de la caspase plut&ocirc;t que les initiateurs de l&#39;activation de la caspase.

Exigence de caspase-2 dans l&#39;apoptose induite par le stress avant la perm&eacute;abilisation mitochondriale.

Voraussetzung f&#xFC;r die Caspase-2 in Stress-induzierten Apoptose vor mitochondriale Permeabilisierung.

Una visualizzazione corrente &egrave; che lo stress citotossico, quali danni al DNA, induce l&#39;apoptosi regolando la permeabilit&agrave; dei mitocondri. Mitocondri sequestrano diverse proteine che, se rilasciato, uccidono attivando caspases, la proteasi che smontare la cella. Citochine attivare i caspases in modo diverso, dall&#39;assemblaggio di complessi recettore che attivare i caspases direttamente; in questo caso, la successiva permeabilization mitocondriale accelera lo smontaggio delle cellule amplificando attivit&agrave; di caspase. Abbiamo trovato che citotossici stress causa attivazione di caspase-2, e che questo caspase &egrave; richiesto per il permeabilization dei mitocondri. Quindi, che ci sostengono cytokine-induced e apoptosi indotta da stress agiscono attraverso percorsi concettualmente simile in cui i mitocondri sono amplificatori di attivit&agrave; di caspase anzich&eacute; iniziatori dell&#39;attivazione di caspase.

Requisito per la caspasi-2 nell&#39;apoptosi indotta da stress prima permeabilization mitocondriale.

&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; DNA &#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9; &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; &#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5206;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x9694;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;;&#x3053;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x306F;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-2 &#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x3068;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D7;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x6982;&#x5FF5;&#x7684;&#x985E;&#x4F3C;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3002;

&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-2 &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3002;

&#xD604;&#xC7AC; &#xBCF4;&#xAE30;&#xB294; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xB4F1; cytotoxic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;, &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xD22C;&#xACFC;&#xC728;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD574;&#xC81C; caspases, &#xBD84;&#xD574; &#xC140; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC8FD; &#xC77C; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. Cytokines &#xC9C1;&#xC811;; caspases &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC870;&#xD569; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; caspases &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC774; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD6C4;&#xC18D; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; permeabilization caspase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD574;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cytotoxic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; 2 caspase&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F;&#xC774; caspase &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; permeabilization&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC720;&#xBC1C; &#xB17C;&#xC7C1; &#xD558; &#xACE0; apoptosis &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; caspase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC570;&#xD504; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; caspase &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790;&#xB294; &#xAC1C;&#xB150;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD589;&#xB3D9;.

&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; permeabilization &#xC804;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; apoptosis&#xC5D0; caspase-2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Una vista actual es que estr&eacute;s citot&oacute;xico, como da&ntilde;os en el ADN, induce apoptosis regulando la permeabilidad de las mitocondrias. Las mitocondrias secuestran varias prote&iacute;nas que, si se libera, matan mediante la activaci&oacute;n de caspasas, las proteasas que desmontar la c&eacute;lula. Citoquinas activan caspasas en forma diferente, montando los complejos de receptores que activan caspasas directamente; en este caso, la posterior permeabilizaci&oacute;n mitocondrial acelera desmontaje celular amplificando la actividad de la caspasa. Encontramos que citot&oacute;xicos estr&eacute;s provoca la activaci&oacute;n de la caspasa-2, y que este caspase se requiere para la permeabilizaci&oacute;n de la mitocondria. Por lo tanto, sostenemos cytokine-inducida y apoptosis inducida por estr&eacute;s act&uacute;an a trav&eacute;s de expresiones similares en las que las mitocondrias son amplificadores de actividad de la caspasa, en lugar de iniciadores de la activaci&oacute;n de caspasas.

Requisito para caspasa-2 en la apoptosis inducida por el estr&eacute;s antes de permeabilizaci&oacute;n mitocondrial.

&#x7A81;&#x89E6; NMDA &#x53D7;&#x4F53; (NMDARs) &#x7EB3;&#x5165;&#x53D7; GluN2 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89C4;&#x5219;&#x63A7;&#x5236;&#x542B;&#x6709; GluN2A &#x548C; GluN2B &#x7684;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF1B;GluN2B &#x5305;&#x542B;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E00;&#x7EB3;&#x5165;&#x7A81;&#x89E6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x800C; GluN2A &#x5C06;&#x7EB3;&#x5165;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x80BA;&#x9759;&#x8109;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; NMDARs &#x5927;&#x9F20;&#x6D77;&#x9A6C;&#x8111;&#x7247;&#x5206;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x7EB3;&#x5165; NMDARs &#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x6027;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x4E9A;&#x57FA; GluN2 &#x5D4C;&#x5408;&#xFF0C;&#x627E;&#x51FA; GluN2B&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; GluN2A&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5FC5;&#x8981;&#x548C;&#x8DB3;&#x591F;&#x5230;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668; NMDARs &#x5230;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5047;&#x5B9A; N-&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; NMDARs &#x5230;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x63A7;&#x5236; NMDA &#x53D7;&#x4F53;&#x7A81;&#x89E6;&#x7EB3;&#x5165;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Synaptic incorporation of NMDA receptors (NMDARs) is regulated by GluN2 subunits with different rules controlling GluN2A- and GluN2B-containing receptors; whereas GluN2B-containing receptors are constitutively incorporated into synapses, GluN2A incorporation is activity-dependent. We expressed electrophysiologically tagged NMDARs in rat hippocampal slices to identify the molecular determinants controlling the mode of synaptic incorporation of NMDARs. Expressing chimeric GluN2 subunits, we identified a putative N-glycosylation site present in GluN2B, but not in GluN2A, as necessary and sufficient to drive NMDARs into synapses in an activity-independent manner. This suggests a novel mechanism for regulating activity-driven changes and trafficking of NMDARs to the synapse.

Molecular determinants controlling NMDA receptor synaptic incorporation.

L&#x26;#39;incorporation Synaptic des r&#xE9;cepteurs NMDA (NMDAR) est r&#xE9;gie par GluN2 sous-unit&#xE9;s avec des r&#xE8;gles diff&#xE9;rentes de contr&#xF4;le GluN2A-et-GluN2B contenant des r&#xE9;cepteurs, tandis que GluN2B contenant les r&#xE9;cepteurs sont constitutivement incorpor&#xE9;s dans les synapses, l&#x26;#39;incorporation GluN2A est d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activit&#xE9;. Nous avons exprim&#xE9; NMDAR &#xE9;lectrophysiologiquement &#xE9;tiquet&#xE9;s dans des tranches d&#x26;#39;hippocampe de rat afin d&#x26;#39;identifier les d&#xE9;terminants mol&#xE9;culaires qui contr&#xF4;lent le mode de constitution synaptique des r&#xE9;cepteurs NMDA. Exprimant chim&#xE9;riques GluN2 sous-unit&#xE9;s, nous avons identifi&#xE9; un site putatif pr&#xE9;sente de N-glycosylation dans GluN2B, mais pas dans GluN2A, comme n&#xE9;cessaire et suffisante pour conduire NMDAR des synapses dans l&#x26;#39;activit&#xE9; d&#x26;#39;une mani&#xE8;re ind&#xE9;pendante. Ceci sugg&#xE8;re un nouveau m&#xE9;canisme de r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;activit&#xE9; ax&#xE9;s sur les changements et la traite des r&#xE9;cepteurs NMDA &#xE0; la synapse.

D&#xE9;terminants mol&#xE9;culaires contr&#xF4;lant incorporation du r&#xE9;cepteur NMDA Synaptic

Synaptische Integration von NMDA-Rezeptoren (NMDARs) wird durch GluN2 Untereinheiten mit unterschiedlichen Regeln, Steuern, GluN2A und GluN2B-enth&auml;lt Rezeptoren reguliert; w&auml;hrend GluN2B-haltigen Rezeptoren konstitutiv in Synapsen aufgenommen sind, ist die GluN2A Einbindung leistungsabh&auml;ngige. Wir &auml;u&szlig;erten electrophysiologically gekennzeichneten NMDARs in Ratte hippocampal Scheiben um die molekularen Determinanten, die Steuerung des Modus der synaptischen Einbeziehung der NMDARs zu identifizieren. Chim&auml;re GluN2 Untereinheiten auszudr&uuml;cken, haben wir eine vermeintliche N-Glycosylation-Site im GluN2B, aber nicht in GluN2A, als notwendig und ausreichend, um mit dem NMDARs zu Synapsen leistungsunabh&auml;ngige Weise identifiziert. Dies deutet auf einen neuen Mechanismus f&uuml;r die Regulierung der Aktivit&auml;t ausgel&ouml;ste &Auml;nderungen und Handel mit NMDARs an der Synapse.

Molekulare Determinanten NMDA-Rezeptor synaptische Aufnahme steuern.

Integrazione sinaptica dei recettori NMDA (NMDARs) &egrave; regolata da subunit&agrave; GluN2 con regole diverse, controllando i recettori che contengono GluN2A e GluN2B; considerando che GluN2B contenenti recettori costitutivamente vengono incorporati nelle sinapsi, GluN2A incorporazione &egrave; attivit&agrave;-dipendente. Abbiamo espresso NMDARs destre contrassegnati in fette hippocampal ratto per identificare i determinanti molecolari controllare la modalit&agrave; di integrazione sinaptica di NMDARs. Esprimendo la subunit&agrave; GluN2 chimerica, abbiamo individuato un sito putativo di N-glicosilazione presente in GluN2B, ma non in GluN2A, come necessario e sufficiente per unit&agrave; NMDARs in sinapsi in modo indipendente dall&#39;attivit&agrave;. Ci&ograve; suggerisce un meccanismo di romanzo per regolamentare le modifiche basate su attivit&agrave; e il traffico di NMDARs alla sinapsi.

Determinanti molecolari controllo integrazione sinaptica NMDA receptor.

NMDA&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#xFF08;NMDARs&#xFF09;&#x306F;GluN2A&#x3068;GluN2B&#x542B;&#x6709;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;GluN2&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;GluN2B&#x542B;&#x6709;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x306B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;GluN2A&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;NMDAR&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6D77;&#x99AC;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;NMDARs&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;GluN2&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;NMDARs&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;GluN2B&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;GluN2A&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;N-&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#xB7;&#x30C9;&#x30EA;&#x30D6;&#x30F3;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3084;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;NMDAR&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x3001;NMDA&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;

NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (NMDARs)&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xACB0;&#xD569;&#xC740; GluN2A &#xBC0F; GluN2B &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xADDC;&#xCE59;&#xC73C;&#xB85C; GluN2 subunits&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; GluN2B &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; constitutively &#xB0C5;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBC18;&#xBA74; GluN2A &#xBC95;&#xC778;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Nmdars&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC950; hippocampal &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0; electrophysiologically &#xD0DC;&#xADF8;&#xAC00; NMDARs &#xD45C;&#xD604;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C1; N glycosylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xB0C5; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; NMDARs &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C;&#xB85C;&#xB294; &#xC5C6;&#xB294; GluN2A &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; Glun2b&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; chimeric GluN2 subunits &#xD45C;&#xD604;. &#xD65C;&#xB3D9; &#xAE30;&#xBC18; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; &#xB0C5;&#xC5D0; Nmdars&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC81C;&#xC5B4; NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC124;&#xB9BD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Synaptic incorporaci&#xF3;n de los receptores NMDA (NMDAR) es regulado por GluN2 subunidades con diferentes normas de control y de GluN2A GluN2B que contienen los receptores, mientras que GluN2B que contienen los receptores est&#xE1;n constitutivamente incorporado en las sinapsis, la incorporaci&#xF3;n GluN2A es dependiente de la actividad. Expresamos NMDARs electrofisiol&#xF3;gicamente etiquetados en rodajas de hipocampo de rata para identificar los determinantes moleculares que controlan el modo de incorporaci&#xF3;n de la NMDAR sin&#xE1;ptica. Expresando quim&#xE9;ricos GluN2 subunidades, hemos identificado un putativo de N-glicosilaci&#xF3;n presente sitio en GluN2B, pero no en GluN2A, seg&#xFA;n sea necesario y suficiente para conducir NMDAR en sinapsis en una manera independiente de la actividad. Esto sugiere un nuevo mecanismo para la regulaci&#xF3;n de la actividad impulsados &#x200B;&#x200B;por los cambios y la trata de NMDAR a la sinapsis.

Ximena Opitz-Araya

Department of Physiology and Biophysics

University of Washington School of Medicine

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

Ximena Opitz-Araya

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Physiology and Biophysics

University of Washington School of Medicine

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

Department of Physiology and Biophysics