Geändert Technik für Coronary Artery Ligation in Mäuse

Zusammenfassung

Das chirurgische Verfahren zum experimentellen Herzinfarkt in Mäusen zu induzieren beginnt mit linken Thorakotomie zwischen der dritten und der vierten Rippe, um die vordere Oberfläche des Herzens und linken Lunge visualisieren. Die linke Koronararterie ligiert ist, wird die Brust geschlossen und der Maus erlaubt ist, spontan zu erholen.

Zusammenfassung

Myokardinfarkt (MI) ist eine der wichtigsten Ursachen für Mortalität beim Menschen ^1-3. Um die Morbidität und Mortalität bei Patienten mit MI brauchen wir bessere Kenntnisse über Pathophysiologie der Myokardischämie zu verbessern. Dieses Wissen kann wertvoll sein, um neue therapeutische Targets für innovative kardiovaskulären Therapien ⁴ definieren. Experimentelle MI-Modell bei Mäusen ist eine zunehmend beliebte kleine Tiermodell in der präklinischen Forschung, in der MI durch permanente oder temporäre Unterbindung der linken Koronararterie (LCA) ⁵ induziert wird. In diesem Video beschreiben wir die Schritt-für-Schritt-Methode, wie experimentelle MI in Mäusen zu induzieren.

Das Tier ist erste betäubt mit 2% Isofluran. Die Maus wird dann unbewussten intubiert und mit einem Ventilator zur künstlichen Beatmung. Die linke Brust ist rasiert und 1,5 cm Schnitt entlang mittleren Axillarlinie in der Haut. Die linke großen Brustmuskel ist unverblümt dissociated bis die Rippen freigelegt sind. Die Muskelschichten werden beiseite und zog dann mit einer Augenlid-Retraktor. Nach diesen Vorbereitungen wird linksseitige Thorakotomie zwischen dem dritten und vierten Rippen ausgeführt, um die vordere Oberfläche des Herzens und linken Lunge visualisieren. Das proximale Segment des LCA Arterie wird dann mit einem 7:0 Ethilon Nahtmaterial die typischerweise induziert eine Infarktgröße ~ 40% des linken Ventrikels ligiert. Am Ende wird die Brust geschlossen und die Tiere bekommen postoperative Analgesie (Temgesic, 0,3 mg/50 ml, ip). Die Tiere sind in einem warmen Käfig, bis Spontanheilung gehalten.

Protokoll

Ein. Protokoll Text

1. Bevor eine Operation, zu betäuben eine männliche Maus (C57BL / 6), 6 Wochen alt oder älter durch Einatmen von 2-5% Isofluran ist. Führen Sie einen Zeh Prise zu bestätigen, dass das Tier ausreichend betäubt ist.
2. Die unbewußte Maus auf seiner Rückseite an einem warmen Pad gelegt, um eine konstante Temperatur von 37 ° C zu halten Der präkordiale Brust auf der linken Seite ist rasiert.
3. Sichern Sie die Maus auf einer Intubation Gerät mit einem Isofluran gefüllte Kammer. Ein Rohr von 0,2 Innendurchmesser in die Maus die Luftröhre durch Mund, dann den intubierten Maus auf einer aseptischen chirurgischen Bereich (37 ° C mittels eines Temperaturreglers) anschließen und den Endotrachealtubus mit einem Beatmungsgerät (Rate von 120 pro Minute, Druck von 4-6 mm H ₂ O); desinfizieren den Bereich mit betadine und 75% Ethanol.
4. Bewerben Augensalbe, um die Maus in die Augen. Zeigen Standard-EKG-Elektroden an den Pfoten und schließen Sie die Maus an den EKG-Schreiber.
5. Verwenden einer sterilen Schere, eine 1,5 cm lange Inzision entlang der mittleren Axillarlinie machen. Scheren sind anstatt einem Skalpell verwendet, um eine Verletzung des darunterliegenden Gewebes in Mäusen verhindern. Dann verwenden Sie stumpfe Spitze Gefäß Schere zu sezieren und Einfahren der präkordialen Muskel von der Brustwand.
6. Führe eine linksseitige Thorakotomie zwischen dem dritten und vierten Rippen, um die vordere Oberfläche des Herzens und linken Lunge visualisieren
7. Weitere einfahren Brustwand mit einem geeigneten Haken, um Visualisierung und Zugänglichkeit zu verbessern. Entfernen Sie den Herzbeutel mit gezahnten Pinzette und stumpfen Schere.
8. Ligieren die linke Koronararterie, indem die Nadel (gebunden mit 7-0 Ethilon Nahtmaterial) unterhalb der Arterie mit einem Band von Myokard zwischen der Kapsel und der Arterie. Eine erfolgreiche Okklusion der Koronararterie wird durch Bewegungsmangel / Akinese der vorderen Wand des linken Ventrikels und durch die Veränderungen der EKG-Aufzeichnung (verified zB ST-Strecken-Hebung, QRS broadening)
9. Schließen der Brust, indem zwei Maschen (6-0 Ethilon Naht) auf der dritten und vierten Rippe.
10. Verwenden Sie 5-0 Ethilon Naht an der Haut zu schließen.
11. Für die postoperative Analgesie, verwalten eine einzelne intraperitoneale Injektion von Buprenorphin (0,05 mg / kg). Die Tiere werden spontan innerhalb von 2-5 min zu erholen nach dem Anhalten Isofluran-Narkose. Schließlich legen Sie die Maus in eine warme Käfig und geben 0,6 mg / ml von Buprenorphin im Trinkwasser (Text-Overlay: 0,6 mg / ml in Trinkwasser) bis zur postoperativen Stress zu vermeiden. Überwacht die Maus für den ersten 24 Stunden nach der Operation.
12. Echokardiographie durchgeführt wird, um die Herzfunktion von 3 Tagen nach Myokardinfarkt zu bewerten. Erfolgreiche Verfahren wird durch Akinese in der vorderen Wand des linken Ventrikels (siehe beiliegende Video Ergebnisse) verifiziert. Am Ende des Versuchs wird das Herz gesammelt und gelagert werden-80oC für weitere Untersuchungen. Dh Genexpression.

Ergebnisse

Instrument	Funktionsbeschreibung
Blunt-Spitze Schere	Verwendet, um Haut, Interkostalraum Brustmuskel und Nähte geschnitten
Eye Retraktor	Verwendet werden, um chirurgische Exposé
Blunt-Spitze Pinzette	Verwendet, um Haut und Muskeln zu begreifen
Nadelhalter	Um eine Nadel zu halten
5-0 Nahtmaterial	Verwendet, um Haut n?...

Diskussion

Das chirurgische Verfahren für LCA Ligation wie in diesem Bericht gezeigt, ist eine zuverlässige und reproduzierbare Methode zur Induktion der experimentellen MI bei Mäusen ^{3, 6.} Die Ligation von LCA entsprechend diesem Protokoll induziert Myokardischämie Eingriff typischerweise ~ 40% des linken Ventrikels ^3. Dies induziert signifikante EKG-Veränderungen im ST-Segment ⁷ und sichtbaren Blässe auf der vorderen Oberfläche des Herzens. Aufgrund der großen Myokardinfarkt, können die ...