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Method Article
Die Zellmembran Modifikation von roten Blutkörperchen (Erythrozyten) mit hyperverzweigten Polyglycerin (HPG) präsentiert wird. Geändert RBCs wurden durch wässrige Zwei-Phasen-Partitionierung, osmotische Fragilität und Komplement-vermittelte Lyse gekennzeichnet. Die Tarnung der Oberflächenproteine und Antigene wurde anhand der Durchflusszytometrie und Micro Typing System (MTS) Blut Phänotypisierung Karten.
Roten Blutkörperchen (RBC) Transfusion ist für die Behandlung einer Reihe von akuten und chronischen medizinischen Problemen wie Thalassämie major und Sichelzellenanämie 1-3. Aufgrund des Vorhandenseins der Vielzahl von Antigenen auf der RBC Oberfläche (~ 308 bekannten Antigene 4), Patienten im chronischen Bluttransfusion Therapie entwickeln Alloantikörpern aufgrund der Übereinstimmung von untergeordneter Fehltreffer Antigenen auf Erythrozyten transfundiert 4, 5. Pfropfung von hydrophilen Polymeren, wie Polyethylenglykol (PEG) und hyperverzweigten Polyglycerin (HPG) einen Ausschluss Schicht auf RBC Membran, die die Wechselwirkung der Antikörper mit Oberflächenantigenen ohne Beeinträchtigung verhindert den Durchtritt von kleinen Molekülen wie Sauerstoff, Glukose und Ionen 3. Gegenwärtig keine Methode ist für die Erzeugung von universellen Erythrozyten Donorzellen zum Teil wegen der großen Herausforderung durch das Vorhandensein einer großen Anzahl von Antigenen (Protein-und Kohlenhydrat-Basis) auf der Oberfläche und der RBC d vorgestelltntwicklung solcher Methoden wird erheblich zur Verbesserung der Transfusion Sicherheit und dramatisch verbessern die Verfügbarkeit und Nutzung von RBC. In diesem Bericht sind die Versuche, die verwendet werden, um Antigen geschützten funktionellen RBCs durch die Membran Pfropfung von HPG und deren Charakterisierung zu entwickeln vorgestellt. HPGs sind hoch biokompatibel kompakten Polymeren 6, 7, und werden voraussichtlich innerhalb der Zelle Glykokalyx, die die Lipid-Membran 8, 9 und Maske RBC Oberflächenantigene 10, 11 umgibt befinden.
A. Hyperverzweigte Polyglycerin Modification (SS-HPG)
B. Vollblut Sammlung und Trennung von Red Blood Cells (RBC)
C. HPG Pfropfen zu RBCs
D. Charakterisierung von HPG Modified RBCs
I. Komplement-vermittelte Lyse
II. Die Tarnung von Dur und Moll Antigene mit MTS-Karten
III. Wässrige Zweiphasen-Partition Messungen
IV. Osmotische Fragilität Messungen
V. Durchflusszytometrie Messungen - Schutz der Rhesus-D (RhD)-Antigen
VI. Durchflusszytometrie Messungen - Expression von CD47
Camouflage von Rhesus D-Antigen und CD47 RBC Oberflächenprotein wurden mittels Durchflusszytometrie mit fluoreszenzmarkierten monoklonalen Antikörpern quantifiziert und ein repräsentatives Ergebnis ist in Abbildung 1 dargestellt. Im Falle der HPG-gepfropften RBCs (grau), verringerte sich die Intensität des Signals (Peak verschoben nach links) im Vergleich zur Kontrollgruppe RBCs (rot und grün), die eine Reduktion der Bindung an Antikörper gegen Zelloberflächen, die die Maskierung der Oberflächen...
Universal-Spender RBCs haben ein großes Potenzial bei der Verbesserung der Blut-Verfügbarkeit und Sicherheit für Bluttransfusion Therapie. Erythrozyten sind auch vielversprechende Drug-Delivery-Fahrzeuge aufgrund ihrer langen Kreislauf und inhärente Biokompatibilität 14, 15 berücksichtigt. Experimente in diesem Papier vorgestellten Auswertung der in vitro Eigenschaften der HPG veränderten Erythrozyten. Die in vitro-Eigenschaften und in vivo Auflage von HPG veränderten Erythr...
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Diese Arbeit wurde von der kanadischen Blood Services (CBS) und der Canadian Institutes of Health Science (CIHR) Research Partnership Fund finanziert. Die Autoren danken der LMB Makromolekül Hub an der UBC Centre for Blood Research für die Nutzung ihrer Forschungs-einrichtungen. Die Infrastruktur Einrichtung wird von der Canada Foundation for Innovation (CFI) und der Michael Smith Foundation for Health Research (MSFHR) unterstützt. R. Chapanian ist ein Empfänger (CIHR / CBS) Postdoc-Stipendien in Transfusion Wissenschaft und Empfänger von MSFHR Nachwuchsforscher Postdoc-Stipendium. JN Kizhakkedathu ist ein Empfänger MSFHR Career Investigator Scholar Award.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Glycidol | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
Trimethylolpropan | Fluka | (ON, Canada) | |
Kaliummethylat | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
Wasserfreiem Pyridin | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
4-Dimethylaminopyridin | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
Bernsteinsäureanhydrid | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
Aceton | Fisher Scientific | (ON, Canada) | |
Wasserfreiem Dimethylformamid | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
N-Hydroxysuccinimid | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
N, N'-Diisopropylcarbodiimid | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
MTS-Karten | Micro Typing System (MTS) Karten (FL, USA) | ||
Dextran 500 kDa | Pharmacia Fine Chemicals | (Schweden) | |
PEG 8 kDa | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
FITC monoklonalen anti-Rhesus D (RhD) | Quotient Biodiagnostics | (PA, USA) | |
PE monoklonalen anti-CD47 | BD Biosciences | (NJ, USA) | |
Drabkin-Reagenz | Sigma Aldrich | (ON, Canada) | |
Tabelle. Chemikalien und Reagenzien für die Pfropfung von HPG Polymere RBC Membran und ihre Analyse verwendet. |
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