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Method Article
Komplexe Fortbewegung in naturalistischen Umgebungen erfordern sorgfältige Koordination der Gliedmaßen beinhaltet Regionen des parietalen Kortex. Das folgende Protokoll beschreibt den Einsatz der reversiblen Kühlung-induzierte Deaktivierung die Rolle des parietalen Bereich 5 in Speicher-geführte Hindernis-Vermeidung in der zu Fuß Katze zu demonstrieren.
Sensorischer Informationen über ökologische Hindernis ist auf komplexe, naturalistische Terrain lässt sich rasch lokomotorische Bewegungen zur Vermeidung anpassen. Beispielsweise kann bei der Katze, visueller Informationen über bevorstehende Hindernis modulieren stepping für Vermeidung. Bewegungsapparates Anpassung kann auch unabhängig von der Vision, auftreten, wie plötzliche taktile Eingaben an das Bein von einem erwarteten Hindernis zur Vertiefung aller vier Beine für Vermeidung ändern können. Solche komplexen Bewegungsapparat umfasst supraspinalen Strukturen, z. B. der parietalen Kortex. Dieses Protokoll beschreibt den Einsatz der reversibel, Kühlung-induzierte kortikalen Deaktivierung parietalen Kortex Beiträge zur Speicher-geführte Hindernis Fortbewegung bei der Katze zu beurteilen. Kleine Abkühlung Schleifen, bekannt als Cryoloops, sind speziell geformt, um diskrete Regionen von Interesse für ihre Beiträge zu einem offenkundigen Verhalten beurteilen zu deaktivieren. Solche Methoden wurden verwendet, um die Rolle der parietalen Bereich 5 in Speicher-geführte Hindernis Vermeidung bei der Katze zu erhellen.
Auf naturalistische, unebenen Gelände kann sensorischer Informationen über ein Hindernis, die Vision per Touch erworben werden können, schnell Fortbewegung zur Vermeidung ändern. Diese sorgfältige Abstimmung der Schrittmotor Bewegungen beinhaltet mehrere kortikalen Regionen1,2. Zum Beispiel haben Bereiche des motorischen Kortex3,4 und parietalen Kortex5,6,7 bei komplexen motorischen Aufgaben wie Hindernis Vermeidung verwickelt. Bei vierbeinigen Tieren müssen Schritt Modulationen erforderlich zur Vermeidung von Hindernis auf den Vorderbeinen und Hinterbeinen erstrecken. Wenn vorwärts Fortbewegung zwischen den Vorderlauf und Hinterläufen Hindernisfreiheit verzögert wird (die auftreten können, wie ein Tier sorgfältig durch eine komplexe, naturalistische Umwelt stalking Beute tritt), dient Informationen über das Hindernis im Speicher beibehalten führen das Hinterbein verstärkt über das Hindernis einmal zu Fuß fortgesetzt wird.
Experimentelle Techniken zur diskreten kortikalen Bereiche deaktivieren können verwendet werden, kortikale Beiträge zur Speicher-geführte Hindernis Fortbewegung zu studieren. Kühlung-induzierte kortikalen Deaktivierung bietet eine Reversible, zuverlässige und reproduzierbare Methode zur Bewertung von kortikalen Beiträge zu einer offenkundigen Verhalten8. Cryoloops aus Edelstahlrohren gefertigt sind spezifisch für die kortikalen Bereich von Interesse, geformt sehr selektiv und diskrete Deaktivierung der Loci zu gewährleisten. Einmal implantiert, gekühlte Methanol durch das Lumen der ein Cryoloop gepumpt, kühlt die Region der Hirnrinde direkt unterhalb der Schleife zu < 20 ° C. Unterhalb dieser kritischen Temperatur ist in der Region der Hirnrinde direkt unterhalb der Schleife synaptische Übertragung gehemmt. Diese Deaktivierung kann umgekehrt werden, indem Sie einfach aufhören den Fluss von Methanol. Diese Methode wurde zur kortikalen Beiträge zur sensorischen Verarbeitung und Verhaltensweisen9,10,11,12,13,14,15 studieren , 16 , 17, sowie die Motorsteuerung saccadischen Auge Bewegungen18 und Speicher-geführte Hindernis Fortbewegung19.
Dieses Protokoll soll reversible Kühlung-induzierte Deaktivierungen verwenden, um die Beteiligung der parietalen kortikalen Bereiche der motorischen Koordination bei der Katze zu beurteilen. Speicher-geführte Hindernis Fortbewegung war speziell, mit oder ohne aktive parietalen Kortex untersucht. Mit diesen Methoden haben erfolgreich die Rolle des parietalen Bereich 5 in Speicher-geführte Hindernis Vermeidung zu Fuß Katze19nachzuweisen.
Alle Verfahren wurden durchgeführt in Einklang mit den nationalen Forschungsrat Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren (achte Auflage, 2011) und des Canadian Council on Animal Care Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren (1993), und waren von der University of Western Ontario tierischen Einsatz Unterausschuss des Universitätsrats auf Animal Care genehmigt.
Das folgende Verfahren kann auf Experimente studieren kortikalen Beiträge zur lokomotorischen Kontrolle in der zu Fuß Katze angewendet werden.
(1) Apparat
(2) Trainingsverfahren
Hinweis: Für erfolgreiche Data Acquisition, sorgt für ein Zeitraum der Ausbildung vor Verhaltens testen, dass jedes Tier die Prüfung Raum und Apparat richtig gewöhnt ist. Wiederholter Exposition zu einer neuartigen Umwelt hilft bei der Reduzierung der überraschender oder anderen belastender Verhaltensweisen. Akklimatisierung variieren zwischen Tieren und 1-2 Monate der Ausbildung erfordern. Anfängliche Akklimatisierung Sitzungen können bis zu 5 min Länge abhängig von der Konzentration und Motivation des Tieres zu essen sein. Nachfolgende Sitzungen soll die Dauer der Zeit zu erhöhen, die das Tier (in der Regel etwa 20-25 min) arbeiten motiviert ist.
(3) Verhaltens-Training und Testprotokoll
Hinweis: Das Hindernis Gedächtnis bemisst sich in zwei Paradigmen: ein visuell-abhängige Hindernis Speicher Aufgabe und eine taktile-abhängige Hindernis-Speicher-Aufgabe. Beide Paradigmen sollte während der Erstausbildung und der anschließenden Tests verwendet werden.
4. Videoanalysen
Hinweis: Um Hindernis Speicher zu beurteilen, beinhalten Analysen während der Erstausbildung und der anschließenden Tests nach dem Abkühlen Schleife Implantation Quantifizierung der Peakhöhe Schritt, Schritt Abstand und der horizontale Abstand zwischen den Zehen und Hindernis auf dem Höhepunkt der einzelnen Schritte für visuelle und taktile Paradigmen (Abbildung 2).
(5) Kühlung Implantation von Loop (Cryoloop)
(6) kortikale Kühlung Protokoll
7. überprüfen das Ausmaß der Kühlung
Dieses Protokoll wurde erfolgreich zur parietalen Kortex Beiträge zum Hindernis Speicher zu Fuß Katze19zu untersuchen. In dieser Studie wurden Cryoloops über parietal Bereichen 5 und 7 in drei Erwachsenen bilateral implantiert (> 6 Monate alt) Katzen (Abb. 5A). Tiere wurden bewertet, im taktilen Hindernis Speicher Paradigma bei fehlender Kühlung (Warm, Kontrollbedingung) oder als Bereich 5 oder 7 bilateral deaktiviert war.
Das beschriebene Paradigma beschäftigt Kühlung-induzierte Deaktivierungen von diskreten kortikalen Bereiche, die mit der Cryoloop um Speicher-geführte Hindernis Fortbewegung bei der Katze zu studieren. Die visuelle und taktile Hindernis Speicher Paradigmen sind ziemlich einfach für Tiere ausführen, da sie naturalistische Bewegungsorgane Verhaltensweisen, die mit minimalem Aufwand auftreten beuten, wenn ein Tier motiviert ist, eine beweglichen Nahrungsquelle zu folgen. Somit ist der Großteil der Ausbildungszeit akkl...
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Wir erkennen dankbar an die Unterstützung der Canadian Institutes of Health Research, Naturwissenschaft und Engineering Research Council of Canada (NSERC) und Canada Foundation for Innovation. C.w. wurde durch ein Alexander Graham Bell Canada Graduate Stipendium (NSERC) unterstützt.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Camera | IDS Imaging Development Systems GmbH | Model: UI-5240CP-C-HQ | |
Intake tubing | Restek | 25306 | Unflanged end is submerged in the methanol reservoir while the flanged end is connected to the pump |
Pump | Fluid Metering, Inc. | Model: QG 150 | |
Nalgene Dewar vacuum flask | Sigma-Aldrich | F9401 | |
Teflon tubing | Ezkem | A051754 | |
Microprobe thermometer | Physitemp | Model: BAT-12 | |
Flanged tube end fittings | Valco Instruments Co. Inc. | CF-1BK | Assorted colours available for colour coding. Packages include the same number of washers as fittings |
Washers | Valco Instruments Co. Inc. | CF-W1 | Extra washers |
Flanging kit | Pro Liquid GmbH | 201553 | |
Tubing connector | Restek | 25323 | |
Tubing cutter | Restek | 25069 | |
Male thermocouple connector | Omega | SMPW-T-M | Used to make cable connection to thermometer |
Thermocouple wire | Omega | PP-T-24S | Used to make cable connection to thermometer |
MATLAB | MathWorks | n/a |
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