Labor Aufzucht von stabil fliegen und andere moosigen Diptera

Zusammenfassung

Ein Verfahren zur Aufzucht stabil fliegt (Stomoxys Calcitrans) präsentiert. Das Verfahren nutzt lokal verfügbare Materialien für Diät-Komponenten, Geräte und Materialien.

Zusammenfassung

Stabilere fliegen, Stomoxys Calcitrans, sind ernsthafte Schädlinge von Tieren, Menschen, Haus- und Wildtiere weltweit. Während der letzten 20 + Jahre führten Änderungen im landwirtschaftlichen Praktiken schwere Ausbrüche von stabil fliegen in mehreren Ländern. Diese Ausbrüche gestört Tierproduktion und menschlichen Erholung führt öffentliche Forderungen zur Erhöhung der Anstrengungen in Forschung und Management für diesen Schädling. Eine einfache und kostengünstige Verfahren zur Aufzucht stabiler Flies für Laborstudien wird vorgestellt. Das Verfahren nutzt lokal verfügbaren Ernährung Komponenten, Geräte und Materialien. Das Verfahren kann für die Aufzucht von anderen moosigen Flies einschließlich Gesicht Fliege (Musca Autumnalis), Horn-Fly (Haematobia Irritans) und Stubenfliege (Musca Domestica) angepasst werden. Das Verfahren erzeugt stabil fliegen Puparia von durchschnittlich 12,5 mg und ~ 35 % Ei zum Erwachsenen überleben. Ca. 3000 fliegen werden in jeder Pfanne hergestellt.

Einleitung

Stabilere fliegen, Stomoxys Calcitrans (L.), sind Hematophagous fliegen, deren schmerzhafte Bisse der Beweidung Verhalten der Tiere zu stören, Schmerzen verursachen und Begleiter Tiere leiden und menschlichen Freizeitaktivitäten weltweit zu stören. Unreife stabilere fliegen entwickeln sich in Gärung vegetativen übrigens oft mit tierischen Abfällen kontaminiert. Veränderten Anbaumethoden und Kulturen haben schwere Ausbrüche von stabil fliegen in Ernterückstände, Gemüse in Australien¹, Zuckerrohr in Brasilien²und Ananas in Costa Rica³produziert. Obwohl nur 14 stabilere fliegen pro Tier die wirtschaftlichen Schwelle^{4 gelten}, wurden Beobachtungen von mehr als 2.000 fliegen pro Tier während den letzten Ausbrüche⁵vorgenommen. Solche Werte bei Befall Host Produktivität beinahe auf null reduzieren und können dazu führen, dass Mortalität⁶. Als Folge agronomisch verbundenen Ausbrüche stabilere fliegen erhalten erneuertes Interesse und Nachfrage nach Labor Kolonien drastisch angestiegen.

Für alle Holometamorphic Insekten erhalten stabilere fliegen alle Nährstoffe für das Wachstum in der unreifen oder larvalen Phase erforderlich. Daher ist ein wichtiger Bestandteil einer Aufzucht System die Larven Nahrung oder das Substrat. Stabile Fliegenlarven entwickeln in einer Vielzahl von Substraten in Feld⁷ eingehalten worden und sie sind abhängig von der mikrobiellen Gemeinschaft der Substrat-^8,-⁹. Natürliche Larven Substrate bestehen hauptsächlich zerlegen oder vegetative Materialien oft verunreinigt mit stickstoffhaltige Abfälle vergären.

Für Labor Aufzucht bestehen stabile Fliege Larven Substrate in der Regel aus einer vegetativen Material und einer zusätzlichen Stickstoff-Quelle. Für stabile Fliege Larven Diäten wurden zahlreiche Materialien verwendet. Die ersten Larven Diäten imitiert natürliche Substrate und gärenden Hafer Stroh und Pferd oder eine Kuh dung^10,11enthalten. Kohlenhydratquellen zählen Weizen Kleie^12,13,14, Luzerne Mahlzeit^12,13,14 und eine kommerzielle Formulierung von chemischen Spezialitäten entwickelt Hersteller Association (CSMA, 33 % Weizenkleie, 27 % Alfalfa-Meal, 40 % Bierhefe Granulat)^13,14,15,16. Stickstoff-Quellen gehören Hefe Aussetzung¹², Fischmehl und Ammonium Bicarbonat¹⁷. Inerte Füllstoffe Materialien gehören oft Diäten einschließlich Hafer Rümpfe¹², Bagasse¹³, Vermiculit¹⁶, Hackschnitzel^13,18 und gebeizte Erdnuss Rümpfe¹⁴.

Ein primäres Ziel der Aufzucht von Labor ist, ein Produkt zu produzieren, die als physiologisch ähnlich "Wildtyp" wie möglich, so dass Laborexperimente Ergebnisse reflektieren diejenigen Bereich Bevölkerung bringt. Dies erfordert, dass in der Züchtung und Selektion minimiert werden weiterhin genetische Vielfalt und Ernährung Ressourcen werden vergleichbar mit denen im Feld. Sekundäre Ziele sind, Arbeit und Kosten zu minimieren. Ein Hauptbestandteil der Minimierung der Kosten ist die Verwendung von lokal verfügbaren Ernährung Komponenten. Die stabile Fliege Aufzucht vorgestellte System wurde entwickelt, um diese Ziele zu erreichen.

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Protokoll

1. Eizellenentnahme (Abbildung 1)

1. Bereiten Sie egging Tasse, platzieren Sie ein Ende des Tuches in ~ 500-mL-Becherglas gefüllt mit Warmwasser (~ 40 ° C). Überschneiden sich die Seiten des Cups und mit einem Gummiband befestigen. Falten Sie das lose Ende des Tuches, zurück über den oberen Rand der Tasse.
2. Ort, an dem egging Cup im Käfig von 8 – 10 Tage alten fliegen für ~ 2 h. trächtige Weibchen stabil fliegt wird auf dem Stoff oviposit.
3. Käfig und spülen Sie Eier aus dem egging Tuch egging Tasse in einer kleinen Pfanne mit Squeeze Waschflasche entfernen.

2. bereiten Sie Larven Aufzucht Pan

1. Medium (Mengen für 1 Aufzucht Pfanne) vorbereiten
   1. Kombinieren Sie, Weizenkleie (500 g), Holzspäne (200 g) und Fischmehl (115 g) in 10 L Plastikschale Pfanne und mischen Sie gut.
   2. Wasser (~ 25 ° C, 1600 mL) Ammonium Bicarbonat (50 g) hinzu und vermischen Sie, bis aufgelöst.
   3. Fügen Sie Wasserlösung trockenen Zutaten zu mischen, um kein unbenetzte Material zu gewährleisten. Level Medium in Pfanne aber nicht komprimieren.
2. Stabile fliegeneier hinzufügen
   1. Machen Sie die Länge der Wanne einer flache Furche in Medium.
   2. 1 mL der stabilen fliegeneier (~ 8.000 Eier) in Furche mit Ei Pipette (Abbildung 2) einzahlen.
      Hinweis: Ei Pipette gemacht durch Schneiden einer Kunststoff abgestufte Pipette am gewünschten Punkt einfügen 100 mesh Bildschirm und klebenden Pipette wieder zusammen.
   3. Decken Sie die Eier mit einer dünnen Schicht des Mediums um Austrocknung zu verhindern.
   4. Decken Sie die Pfanne mit Kissenbezug, schließen Sie mit einem Gummiband und Label. Stellen Sie Pfannen im Larvenstadium Zimmer (23 ± 2 ° C, 30 – 50 % RH und 12:12 [L:D] h Photoperiode).
      Hinweis: Larvalentwicklung dauert 10 – 14 Tage ab dem Zeitpunkt der Eiablage.

(3) pupal Verarbeitung, Larven bewegen an den Rand des Mediums 7 – 9 Tage nach der Eiablage und Pupariate von 13 oder 14 Tage

1. Kugel Puparia, befindet sich in erster Linie an den Rändern der Pfanne unter der Kruste, die bildet auf der Oberfläche des Mediums, heraus und in eine saubere Pfanne gelegt.
2. Füllen Sie Pfanne, mit Puparia, ½ bis ¾ voll Wasser. Unterteilen Sie Klumpen von Puparia und Medium. Weizen Kleie und Protein Komponenten des Mediums sinken bei Puparia > 1 Tag alten Float¹⁹.
3. Entfernen Sie schwimmenden Materialien, Puparia und einige mittelkomponenten mit einem Sieb und Waschen durch eine Reihe von Siebe (#5, #7, #12 und #20) verbleibenden Medium entfernen. #12-Sieb sammelt die Puparia und die #20 hält festen Abfälle in den Abfluss gelangen. Puparia zwischen Siebe mit einer Küchenspüle Sprayer zu waschen.
4. Spülen Sie mit Puparia, das #12 Sieb in einen sauberen Topf. Füllen Sie die Schale zu ½ voll Wasser. Schwimmende Puparia in ein Sieb Gießen und überschüssiges Wasser abtropfen lassen.
5. Transfer Puparia zum Trocknen Bildschirm mit Fan entwässert und lassen Sie trocknen (Abbildung 3).

4. pupal Regal, eine Alternative Methode zum Sammeln von Puparia ist mit einem Pupal Regal¹⁸

Hinweis: Das Regal ist aus einem Stück Kunststoff Schnitt vom Ende eines 10 L Schüssel Pan (10,2 cm hoch x 10,2 cm breit x 31,9 cm lang) gemacht.

1. Bereiten Sie Medium, wie unter 2.1 beschrieben. Konus Medium in Pfanne von ~2.5 cm tief auf einem Ende bis ~7.5 cm tief auf der anderen.
2. Stellen Sie Regal auf Medium im flachen Ende der Aufzucht Pfanne und Klebeband zu verhindern, dass Larven kriechen neben dem Regal (Abbildung 4).
   1. Schwamm (~14.5 x 9,0 x 4,5 cm³, regenerierte Zellulose) zu sättigen und wickeln Sie es in Wasser getränkten Tuch (30,5 x 42 cm², Baumwolle) und Platz auf dem Regal ca. ein halbes Zoll vom Medium.
3. Fügen Sie Eier hinzu, wie in 2.2 beschrieben und wie zuvor Verfahren.
   1. Pfannen täglich zu überprüfen, um sicherzustellen, dass der Schwamm feucht bleibt.
4. Spülen Puparia aus dem Regal, Schwamm und Tuch in eine saubere Schüssel schwenken und 14 Tage nach der Eiablage in Sieb Gießen.

5. Qualitätskontrolle

1. Wiegen Sie alle die Puparia, in Pfanne (total wt.) produziert.
2. 100 Puparia zu isolieren, wiegen und in einem 9 cm Petrischale gelegt.
3. Graf und Sex Erwachsene ~ 5 – 8 Tage später zur Entstehung Rate und Geschlechterverhältnis zu bestimmen. Speichern Sie Petrischalen mit aufgetauchte Erwachsene in einem Gefrierschrank für die Inventur zu einem späteren Zeitpunkt bei Bedarf. Fliegen sind durch die Form ihrer Augen und Breite der Fronto-Orbitale Platte²⁰ oder Genitalien unter geringer Vergrößerung geschlechtlich.
4. Rekord Gesamtgewicht, Gewicht 100 Puparia und Anzahl der aufgetauchten erwachsenen Männchen und Weibchen.

6. Vorbereitung Blut

1. Sammeln Sie frisches Rinderblut aus einer lokalen Schlachthof in 19 L Eimer mit 70 g Natriumcitrat tribasic Dihydrat in 500 mL Wasser. Unter Rühren kräftig für 5 – 10 min Blut und zurück ins Labor.
2. Stamm Blut durch ein Sieb entfernen Blutgerinnsel und aufgeteilt in 2 L Container, Label mit dem Datum der Kollektion und Shop in einem Gefrierschrank (-20 ° C).
3. Entfernen Sie Behälter aus Gefrierfach und in den Kühlschrank stellen benötigt 2 Tage vor. Blut kann für ~ 2 Wochen einmal aufgetaut und in der Tiefkühltruhe gelagert werden, bis zu 1 Jahr verwendet werden.

(7) Erwachsenen Wartung

1. Bereiten Sie Käfige, Linie Käfig unten mit Metzgerei Papier um die Reinigung zu erleichtern.
2. 50 g trocken stabil fliegen Puppen (~ 3.500) in jedem Käfig zu platzieren. Erwachsene Eclose wenige Stunden bis wenige Tage nach der pupal Verarbeitung.
3. Ort ein frisches Blut getränkt feminine Serviette auf jeder Käfig für die Fütterung. Beginnen Sie innerhalb von 24 h von Erwachsenen bewegungsapparate Fütterung und wiederholen Sie täglich bis einen Tag vor der Eiablage (9 – 10 Tage nach Entstehung).
4. Nach der Eiablage (Abschnitt 1) Käfig in Gefrierschrank für 4 – 8 h und dann durch Entfernen des Papiers, Frass von den Seiten und den Boden mit heißem Wasser spülen und alle Oberflächen mit Waschmittel und Chlorbleiche Scheuern reinigen. Käfige mit heißem Wasser abspülen und trocknen lassen.

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Ergebnisse

Larven-Pupariate 10-14 Tage und Erwachsene entstehen 14 – 16 Tage nach der Eiablage. Generationszeit, Ei, Ei, ist ~ 24 Tage. Aufzucht Daten für Mai 2013 bis Januar 2017 mit drei verschiedenen Füllstoffe und zwei Kolonien sind in Abbildung 5dargestellt. Cottonwood gab die beste Ausbeute, 3867 ±1442 ( ± Standardabweichung) Puppen mit einem Gewicht von 12,5 ±1.6 mg mit 74 ±19 % bewegun...

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Diskussion

Stabilere fliegen finden Sie in einer Vielzahl von Substraten in der Natur zu entwickeln und in vielen Arten von Medien im Labor gezüchtet werden können. Wir haben Holzspäne und Vermiculit als Füllstoff-Agenten verwendet. Vermiculit hat gut funktioniert, aber Trennung Puparia von der Aufzucht Medium schwer gemacht und war teuer (~$0.60/pan). Möglicherweise lag wegen der zusätzlichen strenge Puparia vom Medium zu trennen, bewegungsapparate auch mit Vermiculit, 57 % vs. 75 % für Holzspäne. Cottonwood Späne waren v...

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Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Diamalt	Premier Malt Products, Inc., Saddle Brook, NJ	2540
CSMA Fly media	Purina Animal Nutrition, Arden Hills, MN	5S6Z
Thin Maxi Pad	The Tranzonic Co., Cleveland, OH, USA	5001M
Calf Manna	MannaPro, Chesterfield, MO, USA	Manna Pro
Ammonium Bicarbonate	Spectrum Chemical Manufacturing Corp, Gardena, CA	A1125
Wheat bran, Coarse	Siemer Milling Company, Teutopolis, IL
Wood shavings	Tractor Supply Company, Brentwood, TN	502770699
Fishmeal	Consumer Supply Distributing, North Sioux City, SD	F1550
Adult cages	All Aluminum Window Company, Lincoln, Ne	Custom	45 × 45 × 45 cm, 18 × 16 mesh aluminum screen, stockinette access
9 × 28 cm black cotton cloth	Robert Kaufman Fabrics, Los Angeles, CA	K040-114	Egging cloth
10 L plastic dish pans	Rubbermaid, Saratoga Springs, NY	FG2951ARWHT	Larval pans
Stockinette, Cotton, 12 inch x 25 yard roll	Tex-Care Medical Company, Burlington, NC	91311-225