Bewertung der aphidiziden Wirkung entomopathogener Pilze gegen parthenogenetisches Insekt, Senfblattlaus, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Zusammenfassung

Dieses Protokoll stellt ein optimiertes Bioassay-System für abgetrennte Blätter vor, um die Wirksamkeit von entomopathogenen Pilzen (EPF) gegen die Senfblattlaus (Lipaphis erysimi (Kalt.)), ein parthenogetisches Insekt, zu bewerten. Die Methode beschreibt den Prozess der Datenerhebung während Petrischalenexperimenten und ermöglicht es den Forschern, die Virulenz von EPF gegen Senfblattläuse und andere parthenogenetische Insekten konsistent zu messen.

Zusammenfassung

Die Senfblattlaus (L. erysimi) ist ein Schädling, der verschiedene Kreuzblütler befällt und Pflanzenviren überträgt. Um eine umweltfreundliche Schädlingsbekämpfung zu erreichen, sind entomopathogene Pilze (EPF) potenzielle mikrobielle Bekämpfungsmittel zur Bekämpfung dieses Schädlings. Daher ist ein Virulenz-Screening von EPF-Isolaten unter Petrischalenbedingungen vor der Feldanwendung notwendig. Die Senfblattlaus ist jedoch ein parthenogenetisches Insekt, was die Datenerfassung bei Petrischalenexperimenten erschwert. Um dieses Problem anzugehen, wurde ein modifiziertes System für Bioassays mit abgetrennten Blättern entwickelt, bei dem ein Mikrosprühgerät verwendet wird, um Konidien auf Blattläuse zu impfen und das Ertrinken zu verhindern, indem das Trocknen an der Luft nach der Sporensuspension erleichtert wird. Das System hielt während des gesamten Beobachtungszeitraums eine hohe relative Luftfeuchtigkeit aufrecht, und die Blattscheibe blieb über zehn Tage frisch, was eine parthenogenetische Vermehrung der Blattläuse ermöglichte. Um die Ansammlung von Nachkommen zu verhindern, wurde ein tägliches Entfernen mit einem Pinsel eingeführt. Dieses Protokoll demonstriert ein stabiles System zur Bewertung der Virulenz von EPF-Isolaten gegen Senfblattläuse oder andere Blattläuse, das die Auswahl potenzieller Isolate zur Blattlausbekämpfung ermöglicht.

Einleitung

Die Senfblattlaus (L. erysimi) ist ein berüchtigter Schädling, der eine Vielzahl von Kreuzblütlern befällt und erhebliche wirtschaftliche Verluste verursacht¹. Während mehrere systematische Insektizide zur Bekämpfung des Blattlausbefalls empfohlen wurden, gibt der häufige Einsatz dieser Insektizide Anlass zur Besorgnis über die Pestizidresistenz ^2,3. Im Sinne einer umweltfreundlichen Schädlingsbekämpfung könnten daher entomopathogene Pilze (EPF) als geeignete alternative Bekämpfungsstrategie dienen. EPF ist ein Insektenpathogen mit der Fähigkeit, Wirte zu infizieren, indem es i....

Protokoll

HINWEIS: Das vollständige Flussdiagramm ist in Abbildung 1 dargestellt.

1. Sammlung und Pflege von Senfblattläusen

1. Sammlung von Senfblattläusen
   1. Drehen Sie die Blätter um und prüfen Sie visuell auf Befall von Senfblattläusen auf Kreuzblütlern auf dem Feld.
   2. Zeichnen Sie die Informationen über die Probenahmestelle (z. B. GPS) und die Wirtspflanze(n) auf und bestätigen Sie die Historie der Insektizidanwendungen mit den Landwirten.
   3. Verwenden Sie einen Insektensauger oder einen feinen Malpinsel (siehe Materialtabelle), um etwa 50 Senfbl....

Diskussion

Kreuzblütler, eine Gruppe von Gemüsesorten, sind häufig von mehreren Blattlausarten befallen, darunter Senfblattlaus (L. erysimi) und Kohlblattlaus (Brevicoryne brassicae)²⁶. Beide Arten wurden in Taiwan²⁷ gemeldet, und es ist möglich, dass sie an der Sammelstelle koexistieren. Zur Unterscheidung eng verwandter Blattlausarten wurde in dieser Studie eine molekulare Identifizierungstechnik unter Verwendung eines Multiplex-Primer-Sets^21<.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL Inoculating Loop	NEST Scientific	718201
100 bp DNA Ladder III	Geneaid	DL007
2x SuperRed PCR Master Mix	Biotools	TE-SR01
50 mL centrifuge tube	Bioman Scientific	ET5050-12
6 cm Petri dish	Alpha Plus Scientific	16021
6 mm insect aspirator	MegaView Science	BA6001
70 mm filter paper NO.1	Toyo Roshi Kaisha
70% ethanol
9 cm Petri dish	Alpha Plus Scientific	16001
Agar	Bioman Scientific	AGR001.1	Microbiology grade
Agarose	Bioman Scientific	PB1200
BioGreen Safe DNA Gel Buffer	Bioman Scientific	SDB001T
Chromas	Technelysium
GeneDoc
GenepHlow Gel/PCR Kit	Geneaid	DFH300	https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf
Gene-Spin Genomic DNA Isolation Kit	Protech Technology	PT-GD112-V3	http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf
Hemocytometer	Paul Marienfeld	640030
Komatsuna leaves (Brassica rapa var. perviridis)	Tai Cheng Farm	1-010-300410
Microsprayer
MiniAmp Thermal Cycler	Thermo Fisher Scientific	A37834
Mustard aphid (Lipaphis erysimi)
Painting brush	Tian Cheng brush company	4716608400352
Parafilm M	Bemis	PM-996
Pellet pestle	Bioman Scientific	GT100R
Sabouraud Dextrose Broth	HiMedia	MH033-500G
SPSS Statistics	IBM
TAE buffer 50x	Bioman Scientific	TAE501000
Tween 80	PanReac AppliChem	142050.1661