Charakterisierung der Gefäßmorphologie der neovaskulären altersbedingten Makuladegeneration durch Indocyaningrün-Angiographie

Zusammenfassung

Derzeit ist die Fluoreszenzangiographie (FA) die bevorzugte Methode zur Identifizierung von Leckagemustern in Tiermodellen der choroidalen Neovaskularisation (CNV). FA liefert jedoch keine Informationen über die Gefäßmorphologie. Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung der Indocyaningrün-Angiographie (ICGA) zur Charakterisierung verschiedener Läsionstypen von laserinduzierter CNV in Mausmodellen.

Zusammenfassung

Die altersbedingte Makuladegeneration (AMD) ist eine der Hauptursachen für Erblindung bei älteren Menschen, und ihre Prävalenz nimmt aufgrund der alternden Bevölkerung rapide zu. Die choroidale Neovaskularisation (CNV) oder feuchte AMD, die 10 % bis 20 % aller AMD-Fälle ausmacht, ist für alarmierende 80 % bis 90 % der AMD-bedingten Blindheit verantwortlich. Aktuelle Anti-VEGF-Therapien zeigen bei etwa 50 % der Patienten ein suboptimales Ansprechen. Die Resistenz gegen eine Anti-VEGF-Behandlung bei CNV-Patienten ist häufig mit arteriolärer CNV verbunden, während die Responder tendenziell kapillare CNV haben. Während die Fluoreszenzangiographie (FA) häufig zur Beurteilung von Leckagemustern bei Patienten mit feuchter AMD und Tiermodellen verwendet wird, liefert sie keine Informationen über die Gefäßmorphologie der CNV (arterioläre CNV vs. kapillare CNV). Dieses Protokoll führt die Verwendung der Indocyaningrün-Angiographie (ICGA) zur Charakterisierung von Läsionstypen in laserinduzierten CNV-Mausmodellen ein. Diese Methode ist entscheidend für die Untersuchung der Mechanismen und Behandlungsstrategien für Anti-VEGF-Resistenzen bei feuchter AMD. Es wird empfohlen, ICGA zusammen mit FA zu integrieren, um sowohl die Leckage als auch die vaskulären Merkmale von CNV in mechanistischen und therapeutischen Studien umfassend zu beurteilen.

Einleitung

Die altersbedingte Makuladegeneration (AMD) ist eine weit verbreitete Erkrankung, die bei älteren Menschen zu schwerem Sehverlust führt¹. Allein in den Vereinigten Staaten wird sich die Zahl der AMD-Patienten voraussichtlich verdoppeln und bis 2050 fast 22 Millionen erreichen, verglichen mit den derzeitigen 11 Millionen. Weltweit wird die geschätzte Zahl der AMD-Fälle bis 2040 voraussichtlich 288 Millionen erreichen².

Die choroidale Neovaskularisation (CNV), auch bekannt als "feuchte" oder neovaskuläre AMD, kann aufgrund der Bildung abnormaler Blutgefäße unter der zentralen Netzhaut verheerend....

Protokoll

Die in dieser Studie durchgeführten Tierversuche wurden von den Institutional Animal Care and Use Committees (IACUC) am Baylor College of Medicine genehmigt. Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Erklärung der Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) für die Verwendung von Tieren in der Augen- und Sehforschung durchgeführt. Für die vorliegende Studie wurden junge (7-9 Wochen) und alte (12-16 Monate) männliche und weibliche C57BL/6J-Mäuse verwendet. Die Tiere wurden aus einer kommerziellen Quelle bezogen (siehe Materialtabelle).

1. Vorbereitung des Bildgebungssystems

Diskussion

Diese Studie demonstrierte die Verwendung der Indocyaningrün-Angiographie (ICGA) zur Identifizierung der vaskulären Morphologie der arteriolären und kapillaren choroidalen Neovaskularisation (CNV) in Mausmodellen mit laserinduzierter CNV. Die hämoglobingebundenen und infraroten Lichteigenschaften des Farbstoffs Indocyaningrün (ICG) ermöglichten den Nachweis der CNV-Morphologie, was mit der Fluoreszenzangiographie (FA), der aktuellen Methode der Forschungsgemeinschaft, nur schwer zu erreichen ist.

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236