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* Diese Autoren haben gleichermaßen beigetragen
Wir stellen eine Methode zur Untersuchung der Redissemination von Tumorzellen aus Lungenmetastasen vor, die ein chirurgisches Protokoll zur selektiven Photokonversion von Lungenmetastasen beinhaltet, gefolgt von der Identifizierung von redisseminierten Tumorzellen in tertiären Organen.
Metastasen - die systemische Ausbreitung von Krebs - sind die häufigste krebsbedingte Todesursache. Obwohl die Metastasierung gemeinhin als unidirektionaler Prozess angesehen wird, bei dem sich Zellen aus dem Primärtumor ausbreiten und Metastasen säen, können sich Tumorzellen in bestehenden Metastasen auch wiederausbreiten und neue Läsionen in tertiären Lokalisationen hervorrufen, in einem Prozess, der als "Metastasierung-von-Metastasen" oder "Metastasen-zu-Metastase-Seeing" bekannt ist. Die Aussaat von Metastasen zu Metastasen kann die Metastasierungslast erhöhen und die Lebensqualität und das Überleben des Patienten beeinträchtigen. Daher ist es von entscheidender Bedeutung, die Prozesse hinter diesem Phänomen zu verstehen, um Behandlungsstrategien für Patienten mit metastasierendem Krebs zu verfeinern.
Über die Aussaat von Metastasen zu Metastasen ist wenig bekannt, was zum Teil auf logistische und technologische Einschränkungen zurückzuführen ist. Studien zur Metastasen-zu-Metastase-Aussaat stützen sich in erster Linie auf Sequenzierungsmethoden, die für Forscher, die den genauen Zeitpunkt von Metastasen-zu-Metastase-Seeding-Ereignissen untersuchen oder was sie fördert oder verhindert, möglicherweise nicht praktikabel sind. Dies unterstreicht den Mangel an Methoden, die die Untersuchung der Metastasen-zu-Metastasen-Aussaat erleichtern. Um dieses Problem anzugehen, haben wir ein murines chirurgisches Protokoll für die selektive Photokonversion von Lungenmetastasen entwickelt und beschreiben es hier, das eine spezifische Markierung und Schicksalsverfolgung von Tumorzellen ermöglicht, die sich von der Lunge in tertiäre Stellen ausbreiten. Unseres Wissens ist dies die einzige Methode zur Untersuchung der Redissemination von Tumorzellen und der Aussaat von Metastasen zu Metastasen aus der Lunge, die keine Genomanalyse erfordert.
Metastasen sind die häufigste krebsbedingte Todesursache1. Metastasierender Krebs entsteht, wenn sich Zellen des Primärtumors im ganzen Körper ausbreiten und sich zu klinisch nachweisbaren Tumoren in entfernten Organen vermehren 2,3.
Obwohl die Metastasierung gemeinhin als unidirektionaler Prozess angesehen wird, bei dem sich Tumorzellen vom Primärtumor aus ausbreiten und entfernte Organe besiedeln4, deuten immer mehr klinische und experimentelle Beweise darauf hin, dass ein komplexerer, multidirektionaler Prozess im Spiel ist. Es hat ....
Alle in diesem Protokoll beschriebenen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften für die Verwendung von Wirbeltieren durchgeführt, einschließlich der vorherigen Genehmigung durch das Albert Einstein College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee.
Vor der Operation sollen Lungenmetastasen in Mäusen mit Hilfe von Krebszellen erzeugt werden, die ein photokonvertierbares/photoschaltbares Protein exprimieren; Es wurden mehrere Protokolle zur Generierung von Lungenmetastasen veröffentlicht 26,27,28.
Die in diesem Protokoll beschriebenen Operationsschritte sind in Abbildung 1 dargestellt. Kurz gesagt, die Maus wird betäubt und Haare aus dem linken Brustkorb entfernt. Die Maus wird dann intubiert und beatmet, so dass die Maus Sauerstoff erhalten kann, während die Brusthöhle geöffnet ist. Weichgewebe wird entfernt, um den Brustkorb freizulegen, und es wird ein Schnitt im 6. oder 7. Zwischenrippenmuskel gemacht. Ein Retraktor wird in den Interkostalbruch eingeführ.......
In dieser Arbeit beschreiben wir ein chirurgisches Protokoll für die selektive Photokonversion von Tumorzellen in der Lunge. Diese Technik ermöglicht es den Forschern, Tumorzellen in der Lunge selektiv zu markieren und ihr Schicksal zu verfolgen, indem sie sie zu einem späteren Zeitpunkt im ganzen Körper neu identifizieren, was die Untersuchung der Metastasierung von Lungenmetastasen erleichtert. Mit diesem Protokoll war es möglich, photokonvertierte Zellen im Gehirn, in der Leber und in der nicht photokonvertierten.......
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte zu deklarieren.
Die Autoren danken Wade Koba für seine Unterstützung bei der Mikro-Computertomographie (S10RR029545), Vera DesMarais und Hillary Guzik von der Analytical Imaging Facility für ihre Ausbildung und Unterstützung bei der Mikroskopie, dem Einstein Montefiore Cancer Center, dem National Cancer Institute (P30CA013330, R01CA21248, R01CA255153), dem Gruss Lipper Biophotonics Center, dem Integrated Imaging Program for Cancer Research, ein Sir Henry Wellcome Postdoctoral Fellowship (221647/Z/20/Z) und einen METAvivor Career Development Award.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0-30 V, 0-3 A Power Supply | MPJA | 9616 PS | |
12 VDC, 1.2 A Unregulated Plug Supply | MPJA | 17563 PD | |
28 G 1 mL BD Insulin Syringe | BD | 329410 | |
400 nm light emitting diode array lamp | LedEngin Inc. | 897-LZPD0UA00 | Photoconversion lamp, custom-built (individual parts included below) |
5-0 braided silk suture with RB-1 cutting needle | Ethicon, Inc. | 774B | |
9 cm 2-0 silk tie | Ethicon, Inc. | LA55G | |
Baytril 100 (enrofloxacin) | Bayer (Santa Cruz Biotechnology) | sc-362890Rx | Antibiotic used in drinking water |
Buprenorphine | Hospira | 0409-2012-32 | Analgesic |
Cables (Cable Assemblies) 2.1 DC JACK-STRAIGHT 72" BLACK/ZIP CORD | Mouser | 172-7426-E | |
Cables (Cable Assemblies) 2.5 JK-ST 72" ZIP CD | Mouser | 172-0250 | |
Chlorhexidine solution | Durvet | 7-45801-10258-3 | Chlorhexidine Disinfectant Solution |
Compressed air canister | Falcon | DPSJB-12 | |
Extra Fine Micro Dissecting Scissors 4" Straight Sharp/Sharp 24 mm | Roboz Surgical | RS-5912 | Sharp Micro Dissecting Scissors |
Fiber-optic illuminator | O.C. White Company | FL3000 | Used during mouse intubation |
Gemini Cautery Kit | Harvard Apparatus | 726067 | Cautery pen |
Germinator 500 | CellPoint Scientific | GER 5287-120V | Bead Sterilizer |
Graefe forceps | Roboz | RS-5135 | |
High power LEDs - single color ultraviolet 90 watts | Mouser | LZP-D0UA00 | |
Infrared heat lamp | Braintree Scientific | HL-1 | |
Isoflurane SOL 250 mL PVL | Covetrus | 29405 | Anesthetic |
Isoflurane vaporizer | SurgiVet | VCT302 | |
Jacobson needle holder with lock | Kalson Surgical | T1-140 | |
Labeling tape | Fisher Scientific | S68702 | |
LED Lighting Reflectors CREE MP-L SNGL LENS REFLECTOR & LOC PIN | Mouser | 928-C11395TM | |
Long cotton tip applicators | Medline Industries | MDS202055 | |
Masscool / Soccket 478 / Intel Pentium 4/Celeron up to 3.4GHz / Ball Bearing / Copper Core / CPU Cooling Fan | CompUSA | #S457-1023 | |
Micro Dissecting Scissors 4" Straight Blunt/Blunt | Roboz Surgical | RS-5980 | Blunt Micro Dissecting Scissors |
Murine ventilator | Kent Scientific | PS-02 | PhysioSuite |
Nair Hair Removal Lotion | Amazon | B001RVMR7K | Depilatory cream |
Personnet mini retractor | Roboz | RS-6504 | Retractor |
Phosphate Buffered Saline 1x | Fisher Scientific | 14190144 | PBS |
pLenti.CAG.H2B-Dendra2.W | Addgene | 51005 | Dendra2 lentivirus |
Puralube | Henry Schein Animal Health | 008897 | Eye Lubricant |
Rodent intubation stand | Braintree Scientific | RIS 100 | |
Small animal lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | |
SurgiSuite Multi-Functional Surgical Platform for Mice, with Warming | Kent Scientific | SURGI-M02 | Heated surgical platform |
Test Leads 48" TEST LEAD BANANA - Black | Mouser | 565-1440-48-0 | |
Test Leads 48" TEST LEAD BANANA - Red | Mouser | 565-1440-48-2 | |
Tracheal catheter | Exelint International | 26746 | 22 G catheter |
Wound closing system veterinary kit | Clay Adams | IN015 | Veterinary surgical stapling kit |
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