Überwachung des Blutzuckers bei Mäusenachkommen nach intrazytoplasmatischer Spermieninjektion

Zusammenfassung

Hier stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines Mausmodells für intrazytoplasmatische Spermieninjektion (ICSI) vor, das es uns ermöglicht, altersbedingte Veränderungen im Glukosestoffwechsel zu beobachten, die auf ICSI zurückzuführen sind, und Einblicke in ihre potenziellen langfristigen Auswirkungen auf die menschliche Entwicklung zu geben.

Zusammenfassung

Die Lebenserwartung des Menschen ist beträchtlich lang, während Mausmodelle die gesamte menschliche Lebensspanne in einem relativ kurzen Zeitraum simulieren können, wobei ein Jahr Mausleben etwa 40 Menschenjahren entspricht. Die intrazytoplasmatische Spermieninjektion (ICSI) ist eine in der klinischen Praxis häufig eingesetzte assistierte Reproduktionstechnologie. Angesichts ihrer relativ jungen Entstehung vor etwa 30 Jahren sind die langfristigen Auswirkungen dieser Technik auf die menschliche Entwicklung jedoch unklar. In dieser Studie haben wir die ICSI-Methode in Kombination mit dem Embryotransfer (ET) unter Verwendung eines Mausmodells etabliert. Die Ergebnisse zeigten, dass normale Mausspermien nach In-vitro-Kultur und anschließender ICSI eine Befruchtungsrate von 89,57 % und eine Zwei-Zell-Rate von 87,38 % aufwiesen. Nach ET lag die Geburtenrate der Nachkommen bei etwa 42,50%. Darüber hinaus wurden mit zunehmendem Alter der Mäuse Schwankungen im Glukosestoffwechsel beobachtet, die mit der Anwendung der ICSI-Technik in Verbindung gebracht werden können. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die ICSI-ET-Technik der Maus eine wertvolle Plattform für die Bewertung der Auswirkungen von Spermienanomalien auf die Embryonalentwicklung und ihrer langfristigen Auswirkungen auf die Gesundheit der Nachkommen, insbesondere in Bezug auf den Glukosestoffwechsel, bietet. Diese Studie liefert wichtige Erkenntnisse für die weitere Erforschung der potenziellen Auswirkungen der ICSI-Technik auf die menschliche Entwicklung und unterstreicht die Notwendigkeit einer eingehenden Untersuchung der langfristigen Auswirkungen dieser Technologie.

Einleitung

Fruchtbarkeitsprobleme sind zu einem wichtigen Schwerpunkt medizinischer und soziologischer Besorgnis geworden, insbesondere in der modernen Gesellschaft, in der sinkende Fruchtbarkeitsraten und die zunehmende Schwere der Prävalenz und Schwere der Unfruchtbarkeit in den Vordergrund gerückt sind. Die assistierte Reproduktionstechnologie (ART) bietet eine breite Palette von Möglichkeiten, diese Herausforderungen zu bewältigen, wobei die intrazytoplasmatische Spermieninjektion (ICSI) häufig als therapeutische Intervention eingesetzt wird.

Seit Palermo 1992 über die erste erfolgreiche Schw....

Protokoll

Das unten beschriebene Protokoll von ICSI-ET folgt den Richtlinien und wurde von der Animal Ethical Review des Shanghai Institute of Planned Parenthood Research genehmigt. Sicherheitsmaßnahmen: Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien oder biologischen Materialien immer geeignete persönliche Schutzausrüstung (PSA). Verwendung von Hauben: Führen Sie alle Verfahren, bei denen flüchtige Chemikalien oder Aerosole entstehen, in einem zertifizierten Abzug oder einer Biosicherheitswerkbank durch. Verwenden Sie weibliche Mäuse (6-8 Wochen alter B6D2F1-Stamm) für den Superovulationsvorgang.

1. ICSI bei Mäusen

Diskussion

Diese Studie integrierte Techniken der intrazytoplasmatischen Spermieninjektion (ICSI) und des Embryotransfers (ET) von Mäusen, um die assistierte Reproduktionstechnologie (ART) des Menschen umfassend zu rekapitulieren und den Einfluss von ICSI in Verbindung mit ET auf die Entwicklung der Nachkommen zu untersuchen. Die Anwendung der ICSI-Technik mit normalen Mausspermien führte zu einer hohen Befruchtungsrate (86,76 %) und einer hohen 2-Zell-Rate (88,48 %). Nach ET lag die Geburtenrate.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development