Hochauflösende Tandem-Massenspektrometrie zur Untersuchung chemischer Bestandteile von Gynura bicolor DC

Zusammenfassung

Wir beschreiben ein allgemeines Protokoll, das hochauflösende Massenspektrometrie, Analyse und molekulares Docking in der Forschung der traditionellen chinesischen Medizin integriert.

Zusammenfassung

Die Trennung und Analyse der gewünschten chemischen Bestandteile sind wichtige Themen für die Grundlagenforschung der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM). Die Ultra-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, Quadrupol-Flugzeit-Tandem-Massenspektrometrie (UPLC-Q-TOF-MS/MS) hat sich nach und nach zu einer führenden Technologie für die Identifizierung von TCM-Inhaltsstoffen entwickelt. Gynura bicolor DC. (BFH), ein mehrjähriges stielloses Kraut, das in China für Medizin und Lebensmittel verwendet wird, hat medizinische Wirkungen wie die Beseitigung von Hitze, die Befeuchtung der Lunge, die Linderung von Husten, die Zerstreuung von Stasis und die Linderung von Schwellungen. Polyphenole und Flavonoide enthalten zahlreiche Isomere, die die Identifizierung der komplexen Verbindungen in BFH erschweren. In dieser Arbeit wird ein systematisches Protokoll zur Untersuchung chemischer Bestandteile von BFH vorgestellt, das auf Lösungsmittelextraktion und integrierten Daten mittels UPLC-Q-TOF-MS basiert.

Das hier beschriebene Verfahren umfasst systematische Protokolle für die Probenvorbehandlung, die MS-Kalibrierung, die MS-Erfassung, die Datenverarbeitung und die Analyse der Ergebnisse. Die Probenvorbehandlung umfasst das Sammeln, Reinigen, Trocknen, Zerkleinern und Extrahieren. Die MS-Kalibrierung besteht aus Mehrpunkt- und Einzelpunktkorrektur. Die Datenverarbeitung umfasst den Datenimport, die Methodenetablierung, die Analyseverarbeitung und die Ergebnisdarstellung. Repräsentative Ergebnisse des typischen Fragmentierungsmusters von Phenolsäuren, Estern und Glykosiden in Gynura bicolor DC. (BFH) werden in dieser Arbeit vorgestellt. Darüber hinaus werden die Auswahl organischer Lösungsmittel, die Extraktion, die Datenintegration, die Auswahl der Kollisionsenergie und die Methodenverbesserung ausführlich diskutiert. Dieses universelle Protokoll kann in großem Umfang zur Identifizierung komplexer Verbindungen in der TCM verwendet werden.

Einleitung

Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) wird in China seit Tausenden von Jahren klinisch praktiziert und spielt eine wichtige Rolle bei der Erhaltung der Gesundheit der Chinesen¹. Die Zusammensetzung der TCM ist vielfältig und komplex, und die TCM wurde in vielen qualitativen Studien, die sich auf die chemische Zusammensetzung konzentrierten, ausführlich berichtet². Die chemischen Bestandteile der TCM lassen sich grob in folgende Kategorien einteilen: Alkaloide, organische Säuren, Phenylpropanoide, Cumarine, Lignane, Chinonen, Flavonoide, Terpenoide, Triterpenoid-Saponine, Steroid-Sa....

Protokoll

1. Vorbehandlung der Proben

1. Waschen Sie das ganze Kraut von BFH in reinem Wasser, bis keine sichtbaren Ablagerungen und Verunreinigungen mehr vorhanden sind. Legen Sie den sauberen BFH in eine Schüssel und schieben Sie ihn dann in den Ofen (Abbildung 1B). Den Backofen 24 h lang auf 50 °C heizen.
   HINWEIS: Die gesamte Pflanze von BFH wurde in der Provinz Sichuan, China, gesammelt.
2. Zerkleinern Sie getrocknete BFH in einem multifunktionalen Hochgeschwindigkeitsbrecher. Füllen Sie das grobe Pulver in ein 50-Maschen-Sieb (Abbildung 1C). Samme....

Diskussion

Neben der Wasserabkochung¹² ist die Extraktion organischer Lösungsmittel eine weitere gängige Methode der TCM-Vorbehandlung¹³. Nach dem Prinzip der Ähnlichphasenauflösung sind zahlreiche Bestandteile durch die Kombination verschiedener organischer Lösungsmittel¹⁴ extrahiert worden. Die ultraschallgestützte Extraktion ist eine der Hauptmethoden zur Gewinnung von Komponenten in TCM¹⁵. Die .......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software