Sequentielle Blutentnahme aus der Vena cava inferior, gefolgt von einer Pfortader zur Bewertung der mikrobiellen Metaboliten des Darms bei Mäusen

Zusammenfassung

Das Protokoll demonstriert eine Methode zur sequentiellen Entnahme von Blut aus Pfortadern und unterer Hohlvene von Mäusen, um die Produktion und Absorption von mikrobiellen Metaboliten im Darm zu bewerten.

Zusammenfassung

Es ist bekannt, dass mikrobielle Produkte des Darms sowohl lokal im Darm wirken als auch in den Kreislauf aufgenommen werden, wo sich ihre Wirkung auf zahlreiche entfernte Organsysteme erstrecken kann. Kurzkettige Fettsäuren (SCFA) sind eine Klasse von Metaboliten, die von Darmmikroben während der Fermentation von unverdaulichen Ballaststoffen produziert werden. Sie sind heute als wichtige Faktoren dafür anerkannt, wie das Darmmikrobiom die extraintestinalen Organsysteme über die Darm-Lunge-, Darm-Gehirn- und andere Darm-Organ-Achsen im gesamten Wirt beeinflusst. SCFAs werden aus dem Dickdarm über das Darmgewebe in die Pfortader (PV) aufgenommen. Sie passieren dann die Leber und werden in verschiedenen Organen wie Gehirn, Muskeln, Fettgewebe und Lunge konsumiert. SCFAs lassen sich am einfachsten im ausgestoßenen Stuhl messen, genauere Messungen wurden jedoch aus dem intrakolonischen Stuhlinhalt gewonnen. Hier schlagen wir vor, dass die Probenahme von PV und systemischem zirkulierendem Plasma eines einzelnen Probanden für die Untersuchung der Absorption, des Transports und der systemischen Konzentrationen von SCFAs in Mäusen vorzuziehen ist. Wir stellen eine neue Technik zur effizienten Blutentnahme aus der PV und der Vena cava inferior (IVC) vor, die die Entnahme relativ großer Blutmengen aus dem portalen und systemischen Kreislauf ermöglicht. Dies wird durch die Ligatur des PV erreicht, wodurch die Erweiterung oder Vergrößerung des PV ermöglicht wird, wenn es sich aus den Mesenterialvenen, die in es abfließen, wieder füllt. Mit dieser Methode konnten wir die Rate der erfolgreichen Entnahme sowie die Gesamtmenge des entnommenen Blutes verbessern (bis zu 0,3 mL aus IVC und 0,5 mL aus PV).

Einleitung

Kurzkettige Fettsäuren (SCFA) sind eine Hauptklasse von Metaboliten, die von der Darmmikrobiota produziert werden. Ihre entscheidende Rolle in der Interaktion zwischen dem Darmmikrobiom und anderen entfernten Organen¹ wurde durch Forschungen unterstützt, die beschreiben, wie sie Entzündungen modulieren, Signale über dedizierte Rezeptoren senden und als Substrate im Zellstoffwechsel dienen 2,3,4,5. Jüngste Arbeiten unserer Gruppe haben gezeigt, dass SCFAs in vivo wichtige Entz....

Protokoll

Alle Schritte dieses Verfahrens ohne Überleben wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) an der University of California San Francisco genehmigt. Das verwendete Mausgeschlecht und der verwendete Stamm waren männliche C57BL/6J-Mäuse (mit einem Gewicht von 25-35 g und einem Alter von 12-15 Wochen). Weibliche und/oder andere Standard-Mausstämme können ebenfalls verwendet werden.

1. Anästhesie

1. Wischen Sie die untere Hälfte des Bauches der Maus mit 70%igen Ethanoltupfern ab. Verabreichen Sie die Anästhesie durch intraperitoneale Injektion von Tribromethanol (250-40....

Diskussion

Diese Arbeit beschreibt eine innovative in vivo Methode zur nahezu gleichzeitigen Entnahme von Blutproben aus dem IVC und PV in derselben experimentellen Maus. Diese Methode ist nützlich, um den Gehalt an durch die Darmmikrobiota erzeugten Produkten, wie z. B. SCFAs, zu messen, die den Pfortaderkreislauf durchlaufen. Das durchschnittliche maximale Blutvolumen, das während eines terminalen Eingriffs bei Mäusen (mit einem Gewicht von 25-30 g) entnommen werden kann, beträgt etw.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection