Änderung des Folsäure- oder Cholingehalts in der Nahrung, um die Auswirkungen von Mangelerscheinungen auf die Gesundheit der Nachkommen zu untersuchen

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt die Methode zur Reduzierung der Aufnahme von Folsäure oder Cholin über die Nahrung bei weiblichen Mäusen vor der Schwangerschaft mit dem Ziel, den Einfluss der mütterlichen Ernährung auf die Gesundheit der Nachkommen zu untersuchen.

Zusammenfassung

Die Ernährung der Mutter während der Schwangerschaft und Stillzeit spielt eine wichtige Rolle für die neurologische Entwicklung der Nachkommen. Der Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel (1C), der sich auf Folsäure und Cholin sowie andere B-Vitamine konzentriert, spielt eine Schlüsselrolle beim Verschluss des Neuralrohrs des sich entwickelnden Fötus. Die Auswirkungen dieser mütterlichen Ernährungsmängel während der Schwangerschaft auf die Gesundheit der Nachkommen nach der Geburt sind jedoch noch relativ undefiniert. Darüber hinaus kann ein Mangel an Folsäure oder Cholin in der Ernährung der Mutter andere gesundheitliche Ergebnisse bei den Nachkommen beeinträchtigen - was dies zu einem wertvollen Modell macht. Dieses Protokoll zielt darauf ab, das Verfahren zur Induktion eines Mangels im 1C-Stoffwechsel bei weiblichen Mäusen durch Ernährungsumstellungen zu skizzieren. Die Weibchen werden bei der Entwöhnung bis zum Alter von 2 Monaten 4-6 Wochen vor der Paarung auf Diät gesetzt und bleiben während der gesamten Trächtigkeit und Stillzeit auf Diät. Nachkommen dieser Weibchen können auf ihre gesundheitlichen Ergebnisse hin untersucht werden. Weibchen können mehrfach verwendet werden, um Nachkommen zu erzeugen, und Gewebe von Weibchen kann entnommen werden, um 1C-Metabolitenmessungen durchzuführen. Dieses Protokoll gibt einen Überblick darüber, wie mütterliche Ernährungsmängel an Folsäure oder Cholin induziert werden können, um die gesundheitlichen Ergebnisse der Nachkommen zu untersuchen.

Einleitung

Die Ernährung der Mutter während der Schwangerschaft und Stillzeit spielt eine wichtige Rolle für die Entwicklung des Nachwuchses. Der Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel (1C) ist ein wichtiges metabolisches Netzwerk, das Ernährungssignale mit Biosynthese, Redoxhomöostase und Epigenetik integriert. Folsäure und Cholin sind zentrale Bestandteile von 1C, die eine wichtige Rolle beim Verschluss des Neuralrohrs spielen. Es wird Frauen allgemein empfohlen, während des gebärfähigen Alters Folsäure und Cholin zu ergänzen¹. Während die entscheidende Rolle von Folsäure bei der Entwicklung des Fötus eindeutig erwiesen ist, bleiben die zugrunde liegenden Mechani....

Protokoll

Dieses Protokoll wurde genehmigt, und alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Institutional Animal Care and Use Committee der Midwestern University (Protokoll 2983) verwendet. In dieser Studie wurden weibliche C57BL/6J-Mäuse im Alter von 2 Monaten (Körpergewicht, ~20 g) verwendet. Im Allgemeinen können weibliche Mäuse im gebärfähigen Alter verwendet werden¹⁰. Um sicherzustellen, dass Auswirkungen auf den Wurf vermieden werden, müssen für jede Diät mehrere weibliche Tiere verwendet werden¹¹. Die Einzelheiten zu den Reagenzien und der in der Studie verwendeten Ausrüstung sind in der Mate....

Diskussion

Bei der Implementierung dieses Protokolls in Forschungslabors gibt es einige wichtige Hinweise, die Forscher vor Beginn von Experimenten beachten müssen. Erstens muss bei der Herstellung von Diäten genügend Vorlaufzeit eingeräumt werden, um die Diät vor Beginn der experimentellen Studie herzustellen. Die Vorlaufzeiten können von Unternehmen zu Unternehmen variieren, und auch der Versand von Futter muss berücksichtigt werden. Weibliche Mäuse, die sich im gebärfähigen Alter (~2-2,5 Monate im Alter) befinden, kön.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera