Elektrophoretische Trennung von Proteinen

Zusammenfassung

In diesem Video zeigen wir eine Methode zur elektrophoretischen Trennung von Proteinen unter Verwendung von Poly-acrylimid Gelelektrophorese (PAGE).

Zusammenfassung

Elektrophorese wird verwendet, um komplexe Gemische von Proteinen (z. B. von Zellen, subzellulären Fraktionen, Säulenfraktionen oder Immunpräzipitaten) zu trennen, die Untereinheit Kompositionen zu untersuchen und um die Homogenität der Protein-Proben zu überprüfen. Es kann auch dazu dienen, um Proteine ​​für den Einsatz in weiteren Anwendungen zu reinigen. In Polyacrylamidgelelektrophorese, Proteine ​​in Reaktion auf ein elektrisches Feld durch die Poren in einem Polyacrylamid-Gel-Matrix zu migrieren, Porengröße nimmt mit steigender Acrylamid-Konzentration. Die Kombination von Porengröße und Protein Ladung, Größe und Form bestimmt die Wanderungsgeschwindigkeit des Proteins. In dieser Einheit ist die Standard-Laemmli-Methode für die diskontinuierliche Gelelektrophorese unter denaturierenden Bedingungen beschrieben, dh in Gegenwart von Natriumdodecylsulfat (SDS).

Protokoll

Der vollständige Text Protokoll für diesen experimentellen Ansatz ist in Current Protocols in Molecular Biology .