Um mit der pharmakologischen Analyse der zweifarbigen F1-Arabidopsis thaliana zu beginnen, werden die Keimblätter von sieben Tage alten transgenen Sämlingen separiert und entfernt. Geben Sie 500 Mikroliter einer 30-Mikromol-Brefeldin-A- oder BFA-Lösung in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. Tauche die präparierten Sämlinge hinein.
Befestigen Sie eine 10-Milliliter-Spritze fest am Mikrozentrifugenröhrchen und legen Sie eine Minute lang ein Vakuum an. Entfernen Sie die Spritze, bevor Sie die Probe vor der Bildgebung 30 Minuten lang in der Lösung inkubieren. Als nächstes tauchst Du den präparierten, sieben Tage alten Sämling in 25-Millimolar-Wortmannin.
Wenden Sie das Vakuum eine Minute lang an, bevor Sie die eingetauchte Probe 30 Minuten lang inkubieren. Die Untersuchung von ERL-1-Transportrouten in transgenen Pflanzen zeigte, dass eine 30-minütige Exposition gegenüber Brefeldin A-Lösung zum Nachweis von ERL-1-YFP in großen Kompartimenten, den sogenannten BFA-Körpern, führte. Es deutete darauf hin, dass Brefeldin A den ERL-1-Transport blockieren könnte, was auf das Recycling oder die Endozytose von ERL-1 hindeutet.
Wenn transgene Substanzen 30 Minuten lang mit Wortmannin behandelt wurden, wurden ringförmige Strukturen, sogenannte WM-Körper, durch ERL-1-YFP hervorgehoben. Es zeigte sich, dass ERL-1-YFP zu multivesikulären Körpern transportiert wurden, was darauf hindeutet, dass ERL-1 dem Weg zu Vakuolen zum Abbau folgte.
