Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Beginnen Sie mit der Anpassung der Konzentration der aufgetauten Stammzellsuspension aus murinem Fettgewebe unter Verwendung von PBS mit 5%igem fötalem Kälberserum. Aliquotieren Sie 100 Mikroliter der Suspension mit 100.000 Zellen in ein 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Fügen Sie die entsprechenden Mengen Anti-CD105 AF594 und Anti-CD31 AF680 gemäß den Anweisungen des Herstellers hinzu.

20 Minuten im Dunkeln bei vier Grad Celsius inkubieren. Entfernen Sie überschüssigen Fleck, indem Sie ihn mit PBS/FBS waschen und fünf Minuten lang bei 250 x g zentrifugieren. Resuspendieren Sie die Zellen in 300 Mikrolitern 1%Formalin.

Erstellen Sie ein Punktdiagramm, indem Sie auf das Polygonsymbol klicken, um die gewünschte Teilpopulation auszuwählen und die Schuttflächen mit FSC-A- und SSC-A-Gating auszuschließen. Klicken Sie anschließend auf das Polygonsymbol, um ein neues Punktdiagramm zu generieren und die Duplex- und Mehrfachzellen mit SSC-H im Vergleich zu SSC-A gefolgt von FSC-H und FSC-A auszuschließen. Verwenden Sie Y610-mCHERRY für die AF594- bzw. R660 APC-A-Detektoren für die AF680-Fluorophore.

Klicken Sie auf das Quadrantensymbol und legen Sie den Schwellenwert jedes Detektors für Autofluoreszenzzellen fest. Wählen Sie Proben aus, die mit CD105 und positiver Population gekennzeichnet sind, die auf Q1LR angezeigt werden sollen. Wählen Sie als Nächstes Proben aus, die mit CD31 und positiver Population gekennzeichnet sind, die auf Q1LR angezeigt werden sollen.

Die Immunphänotypisierung zeigte, dass 98,7 % der Zellpopulation positiv für CD105 waren, während nur 5,88 % den CD31-Marker exprimierten.