Verwenden Sie für diese Studie kleine braune Zikaden oder SBPHs, die in Reissämlingen aufgezogen wurden. Sobald die Kulturen fertig sind, geben Sie die gewachsenen SBPHs in ein Zentrifugenröhrchen und legen Sie sie für 10 bis 30 Minuten in ein Eisbad. Legen Sie dann einen gefrorenen SBPH mit dem Bauch nach oben auf einen Objektträger unter einem Stereomikroskop und stellen Sie den Fokus auf seine sechs Beine ein.
Bereiten Sie zwei hochpräzise Pinzetten mit ultrafeinen Spitzen vor. Drücken Sie mit einer Pinzette auf den Körper des Insekts, um ihn an Ort und Stelle zu halten, und ziehen Sie vorsichtig ein Bein mit der anderen Pinzette ab. Drücken Sie dann sanft auf die Brust des Insekts, damit die Hämolymphe durch die Wunde fließen kann.
Um die Hämolymphe zu sammeln, bereiten Sie eine Mikropipette vor, indem Sie ein Mikroliter-Kapillarröhrchen in den Pipettenkolben einführen. Platzieren Sie das Kapillarröhrchen in der Nähe der Insektenwunde und halten Sie den Mikropipettenkolben fest. Berühren Sie die Kapillarspitze der austretenden Hämolymphe und sammeln Sie sie.
Sobald das Kapillarröhrchen die gewünschte Skalenlinie erreicht hat, blockieren Sie das kleine Loch am Pipettenkolben leicht mit dem Finger, um den Absorptionsprozess zu stoppen. Entleeren Sie dann die gesammelte Hämolymphe in 100 Mikroliter PBS-Puffer. Die Genauigkeit der Hämolymphentnahme wurde mittels SDS-PAGE bestätigt, die in allen drei separat erhobenen Hämolymphproben einen ähnlichen Proteingehalt zeigte.
Bei den Larven lag die Gesamtproteinkonzentration bei etwa 3,7 Milligramm pro Milliliter. Bei erwachsenen weiblichen und männlichen SBPHs lagen die Proteinkonzentrationen bei etwa 3,5 bzw. 3,6 Milligramm pro Milliliter, was keinen signifikanten Unterschied zwischen den drei Proben zeigte. Die Larvenhämolymphe zeigte Hämozyten von zwei bis 20 Nanometern Größe.
Zudem war die Zellkonzentration in den drei gesammelten Hämolymphproben vergleichbar.
