Nach dem Implantieren der Kopfplatte und des Plugs wird das Tier mit der Kopfplatte auf einem rotierenden Laufband befestigt. Stellen Sie das Laufband unter das Zwei-Photonen-Mikroskop und stellen Sie die Höhe in eine geeignete Position ein. Platzieren Sie einen schwarzen Aluminiumkegel zwischen dem Objektiv und der Kopfplatte, um eine Lichtverschmutzung durch den Monitor für die visuelle Stimulation zu vermeiden.
Um eine Zwei-Photonen-Bildgebung durchzuführen, stellen Sie die Laserleistung an der Probenebene zwischen 20 und 80 Milliwatt ein. Scannen Sie ein Sichtfeld von 600 x 600 Mikrometern bei 4,8 Hertz mit einer räumlichen Auflösung von 2,4 Mikrometern pro Pixel und bilden Sie neuronale Aktivität bis zu 350 Mikrometer Tiefe ab. Zeichnen Sie mit einem Drehgeber die Fortbewegung der Maus auf dem Laufband auf.
Verwenden Sie eine Kamera mit einem 50-Millimeter-Objektiv, um die Pupillengröße und -position aufzuzeichnen. Synchronisieren Sie schließlich diese Aufzeichnungen und Bildaufnahmen mit der visuellen Stimulation, indem Sie die vom Stimulationscomputer gesendeten Trigger aufzeichnen. Die Kalziumantworten von SC-Neuronen aus einer Wildtyp-Maus und die Standardabweichungsprojektion der Fluoreszenz über Bilder werden vorgestellt.
