Beginnen Sie mit dem Transfer des betäubten Tieres in den stereotaktischen Rahmen und befestigen Sie dann den Kopf im Nasenkonus und in den Ohrbügeln. Platzieren Sie die Sonden zur Messung des Pulses, der Sauerstoffsättigung, des Blutdrucks und der Temperatur des Tieres. Augensalbe auftragen.
Entfernen Sie die Haare mit Enthaarungscreme und reinigen Sie die Kopfhaut aseptisch mit drei Passagen Jod und Alkohol. Für eine terminale Untersuchung wird die Kopfhaut mit einer chirurgischen Schere entfernt und der Schädel etwa drei Millimeter von der Lamboidnaht kaudal und drei Millimeter frontal zum Bregma freigelegt. Schneiden Sie die Kopfhaut parietal heraus, um den inneren Teil des Schläfenmuskels auf beiden Seiten freizulegen.
Entfernen Sie dann das restliche subkutane Bindegewebe, so dass der Schädel sauber und trocken ist, um die stimulierenden Elektroden anzubringen. Tragen Sie dann leitfähiges Gel auf die Seite der Elektroden auf, die mit dem Schädel in Kontakt kommen. Legen Sie die Elektrode auf diesen Schläfenmuskel und befestigen Sie sie mit chirurgischem Sekundenkleber an intermittierenden Stellen am Rand.
Tragen Sie dann die Lidocainpaste auf beiden Seiten auf den Schläfenmuskel und die Kopfhaut auf, ohne die Elektroden zu stören. Testen Sie die Impedanz der extrakraniellen stimulierenden Elektroden. Legen Sie dann die Maus unter ein Laser-Speckle-Imaging-Gerät ohne intrakranielle Aufzeichnungselektroden.
Um eine Stimulation zwischen den beiden tACS-Elektroden des Schädels durchzuführen, verwenden Sie ein handelsübliches, für den Menschen kompatibles Stimulationsgerät, das einen konstanten Strom liefert. Holen Sie sich vor der Stimulation eine klare Ausgangslinie. Wenden Sie kurze Perioden der Ein-/Aus-Stimulation mit verschiedenen Amplituden auf beiden Seiten des Schädels an.
Sorgen Sie für eine klare Ausgangslinie nach der Stimulation. Nachdem die extrakraniellen Stimulationselektroden vier Millimeter seitlich auf jeder Seite des Schädels platziert wurden, markieren Sie die Position der Bohrlöcher bei zwei Millimetern auf jeder Seite der Mittellinie, vier Millimeter voneinander entfernt und orthogonal zur sagittalen Naht. Bohren Sie dann zwei Gratlöcher für die Glaselektroden.
Füllen Sie diese Bohrlöcher mit sterilem Mineralöl, um das Eindringen von Strom in den Schädel von den extrakraniellen Elektroden zu verhindern. Füllen Sie dann gepoolte Glasmikroelektroden mit 0,2 molaren Natriumchlorid und platzieren Sie sie mit einem Mikromanipulator in die beiden Gratlöcher, die seitlich an der sagittalen Naht platziert sind. Setzen Sie die Glasmikroelektroden in die Gratlöcher ein.
Als nächstes testen Sie die Impedanz der extrakraniellen Stimulationselektroden nach der Platzierung des Bohrlochs, um sicherzustellen, dass diese den Stromfluss in das Gehirn nicht stören. Um den zerebralen Blutfluss zu messen, der sich aus der extrakraniellen Stimulation ergibt, legen Sie die Maus unter ein Laser-Speckle-Imaging-Gerät mit intrakraniellen Aufzeichnungselektroden. Nach dem Einführen in das Gehirn führen Sie Tiefenprofile in verschiedenen symmetrischen Tiefen durch, um sicherzustellen, dass sich diese Glasmikroelektroden etwa einen Millimeter innerhalb der Großhirnrinde befinden.
Verwenden Sie ein Digitalisierungssystem, um kontinuierliche Daten von den Dopplersonden und Mikroelektroden über eine ausreichend stabile Basisliniendauer aufzuzeichnen. Wenden Sie dann die Ein/Aus-Stimulation an und testen Sie die zusätzliche kraniale Stimulation. Für Experimente, um eine sich ausbreitende Depression zu induzieren, fügen Sie ein drittes Bohrloch auf der rechten Seite des Schädels hinzu, 1,5 Millimeter rostral zur koronalen Naht und einen Millimeter lateral zur hinteren Stirnnaht.
Füllen Sie dieses Gratloch mit KCL für die spätere Anwendung. Als Reaktion auf die tACS niedriger Intensität wurden Daten für die intrakraniellen direkten elektrischen DC-Aufzeichnungen und die bilateralen Laser-Doppler-Aufzeichnungen des zerebralen Blutflusses gewonnen. Eine kleine Reaktion wurde als Reaktion auf einen Stimulus von 0,75 Milliampere beobachtet, während eine größere Reaktion als Reaktion auf einen Stimulus von einem Milliampere beobachtet wurde.
Sowohl bei elektrischen als auch bei zerebralen Blutflussspuren waren die Reaktionen zwischen der rechten und linken Schädelhälfte asymmetrisch. Die Laser-Speckle-Schädelbildgebung des zerebralen Blutflusses während der Attacken zeigte einen erhöhten Blutfluss als Reaktion auf die Stimulation, der gleichmäßig im gesamten Kortex verteilt wurde. Nach der Stimulation kehrte der Blutfluss zum Ausgangswert zurück.
