Verwenden Sie die Zellsuspensionen, die nach der Verdauung der Kniegelenke von Mäusen gewonnen werden, und säen Sie die Suspension auf die kollagenbeschichtete Schale. Die Schale eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5% Kohlendioxid inkubieren. Nach der Inkubation werden nicht adhärente Zellen mit einer Pipette gesammelt.
Waschen Sie die mit Kollagen beschichtete Schale mit Nährmedium und sammeln Sie das Medium. Geben Sie dann frisches Medium in die Schale, um die adhärenten Zellen zu kultivieren, die eine fibroblastoide Morphologie aufweisen. Behandeln Sie die Zellen mit 0,05 % Trypsin in Hanks ausgewogener Salzlösung und passieren Sie die subkonfluenten Zellen.
Wenn hochreine fibroblastenähnliche Zellen benötigt werden, führen Sie eine wiederholte Passage durch. Stellen Sie sicher, dass Sie Zellen mit weniger als fünf Durchgängen verwenden. Fibroblasten-ähnliche Zellen wurden aus entzündlichem Arthritisgewebe isoliert und in sieben bis acht Wochen alten weiblichen C57BL/6-Mäusen induziert.
Die Reinheit der isolierten Zellen wurde durch RTQPCR-mRNA-Expression von synovialen Fibroblastenmarkern wie Vcam1, Cdh11, Col6a1 und Csf1 in den isolierten Zellen beurteilt, was darauf hindeutet, dass die fibroblastenreichen Fraktionen aus Synovitisgewebe isoliert wurden.
