Öffnen Sie zunächst die Softwareanwendung, indem Sie auf das Symbol für eine ausführbare Datei doppelklicken. Geben Sie die Sequenzen der schweren Kette und der leichten Kette in die Textfelder unter der Spalte 1 ohne Leerzeichen ein. Fügen Sie für bispezifische Antikörper zusätzliche schwere oder leichte Ketten in den zweiten Satz von Textfeldern unter der Spalte 2 hinzu.
Lassen Sie diese Felder für monoklonale Antikörper mit identischen schweren und leichten Ketten leer. Aktivieren Sie die Kontrollkästchen Endklemmenzyklisierung und C-Klemmenclipping, wenn diese schweren Kettenklemmenvarianten anwendbar sind. Fügen Sie chemische Modifikationen, einschließlich Linker und Nutzlast für Antikörper-Wirkstoff-Konjugate, zu den schwer- und leichtkettigen chemischen Modifikationsboxen hinzu, indem Sie elementare Zusammensetzungen wie Kalziumchlorid verwenden.
Diese Modifikationen werden der jeweiligen Proteinuntereinheit oder -kette hinzugefügt. Geben Sie die Anzahl der Disulfidbrücken in den Proteinmolekülen im Textfeld mit der Bezeichnung Gesamtanzahl der Disulfide an. Geben Sie die Anzahl der unreduzierten Schwerkettendisulfidbindungen in das Textfeld "Unreduzierte Schwerkettendisulfide" und die Anzahl der unreduzierten Leichtkettendisulfidbindungen in das Textfeld "Unreduzierte Leichtkettendisulfide" ein, je nach Ausmaß der Reduktion.
Wenn an der leichten Kette der monoklonalen Antikörper eine Glykosylierung vorhanden ist, aktivieren Sie das Kontrollkästchen Leichte Kette ist glykosyliert. Klicken Sie auf die Schaltfläche Durchsuchen, um einen Ausgabeordner für das Textfeld Ausgabeordner auszuwählen, und geben Sie den Namen der Ausgabedatei ohne Dateierweiterung in das Textfeld Excel-Datei ohne Erweiterung ein. Klicken Sie dann auf die Schaltfläche Senden.
Auf dem Bildschirm erscheint die Meldung "Massenberechnungsbericht erstellt" und die Ausgabedatei befindet sich in dem vom Benutzer festgelegten Ordner. Die App wird automatisch geschlossen. In dieser Tabelle sind die chemischen Zusammensetzungen, berechneten Massen, gemessenen Massen und Massenfehler verschiedener monoklonaler Antikörper zusammengefasst.
Ein kommerziell erhältlicher monoklonaler Antikörperstandard wurde ausgewählt, um einen konventionellen monoklonalen Antikörper mit identischen schweren Ketten, identischen leichten Ketten und einer N-verknüpften Glykosylierungsstelle in der FC-Region darzustellen. Ein monoklonaler Antikörper mit einer zusätzlichen Leichtketten-N-verknüpften Glykosylierung, ein bispezifischer monoklonaler Antikörper und ein Antikörper-Wirkstoff-konjugierter monoklonaler Antikörper wurden ebenfalls ausgewählt, um die Anwendungsmöglichkeiten zu erweitern. Die kleinen Massenfehler zwischen den berechneten Massen und den gemessenen Massen lagen innerhalb der normalen Massenfehler-Akzeptanzkriterien, was darauf hindeutet, dass die berechneten Massen genau waren.
