Beginnen Sie mit dem Sammeln von Samen der wilden Sojabohne, S.Americanum und der lokalen Kürbisart. Säen Sie die Samen in einer Tiefe von einem Zentimeter in Vermiculit und gießen Sie sie gründlich. Kultivieren Sie sie in einer Wachstumskammer bei ca. 70% relativer Luftfeuchtigkeit.
Nehmen Sie den A.rhizogenes Stamm K599 aus dem 80 Grad Celsius heißen Gefrierschrank und aktivieren Sie ihn auf einem festen LB-Medium bei 28 Grad Celsius für 48 Stunden. Wählen Sie dann einen einzelnen Klon des Stammes K599 aus und kultivieren Sie ihn 12 Stunden lang in einem Milliliter flüssigem Antibiotika-haltigem LB-Medium. 500 Mikroliter der Bakteriensuspension gleichmäßig auf ein festes Antibiotikum mit LB-Medium verteilen und 24 Stunden bei 28 Grad Celsius inkubieren.
Nach sieben Tagen, wenn die Keimblätter der Sämlinge entfaltet sind, schneide mit einem sterilisierten, scharfen Skalpell etwa 0,5 bis einen Zentimeter des Hypokotyls ab. Verwerfen Sie die Primärwurzel und einen Teil des Hypokotyls. Beschichten Sie den Hypokotylschnitt mit K599-Bakterien.
Pflanzen Sie Sämlinge in feuchten Vermiculit und infizieren Sie 30 Pflanzen jeder Art mit Hilfe der A.rhizogenes-vermittelten Haarwurzeltransformation. Gießen Sie die Pflanzen dann mit fünf Millilitern resuspendierter K599-Bakteriensuspension in viertelstarkem Gamborg B5 Basismedium. Decken Sie die Töpfe mit einer durchsichtigen Plastiktüte ab und stellen Sie sie in eine Wachstumskammer.
Lassen Sie die Pflanzen etwa 12 Tage nach der Inokulation wachsen. Zu diesem Zeitpunkt sollten an der Schnittstelle neue behaarte Wurzeln gebildet werden, die in der Regel eine Länge von zwei bis fünf Zentimetern erreichen. Mit einem CAMI-Lumineszenz-Bildgebungssystem mit grünem Anregungslicht bei 540 Nanometern und Emission bei 600 Nanometern wird die Expression des Reportergens DsRed2 nachgewiesen.
Die Wurzeln von Mischpflanzen aus wilder Sojabohne, S.Americanum und Kürbis werden unter natürlichem und grünem Anregungslicht visualisiert.
