Um eine omega-förmige Kopfstange für die Zebrafisch-Kopfstütze vorzubereiten, befestigen Sie ein Stück Modelliermasse auf Ölbasis an einem dreiachsigen Mikromanipulator. Führen Sie dann einen Arm der Kopfstange in den Ton ein und richten Sie die Kopfstange horizontal aus. Bereiten Sie die Kanone vor, um den Körper des Fisches während der Operation an Ort und Stelle zu halten.
Um überschüssige Haut und Wasser von den Befestigungsstellen des Schädels zu entfernen, bereiten Sie vier Gewebetupfer vor, indem Sie ein Papiertuch in ein drei Zentimeter großes Quadrat schneiden. Falten Sie dann die Papierquadrate entlang ihrer Diagonalen, um eine röhrenartige Struktur zu erzeugen, und drehen Sie die Enden der Hülse zu einer feinen Spitze. Nachdem Sie den Fisch mit 0,03 % TMS betäubt haben, führen Sie eine Spritzenperfusion mit 0,01 % TMS durch, um die Sedierung während des gesamten Eingriffs aufrechtzuerhalten.
Wickeln Sie den Fisch von der Schwanzspitze bis etwa einen Millimeter kaudal bis zur Kieme in feuchtes Papiertuch. Wickeln Sie dann einen weichen Kunststoffschlauch mit einem Längsschlitz um das Papiertuch, das den Fisch vom Ende des Schwanzes bis etwa zwei Millimeter kaudal zur Kieme bedeckt. Wickeln Sie das Papiertuch um den Schlauch.
Wickeln Sie dann ein weiches Plastikröhrchen, das aus dem Kolben einer Kunststoff-Transferpipette geschnitten wurde, um das Papiertuch. Lade den eingewickelten Fisch in die Kanone. Entfernen Sie dann mit einem Skalpell die Haut, die die Befestigungsstellen bedeckt, zwei dreieckige Bereiche des Schädels rostrolateral zum Kleinhirn und über den Kiemen.
Verwenden Sie dann Gewebetupfer, um die Befestigungsstellen zu trocknen und die verbleibende Haut zu entfernen. Tragen Sie mit einer 10-Mikroliter-Pipettenspitze einen Tropfen Gewebekleber auf die Mitte jeder Befestigungsstelle auf. Bringen Sie den Fischkörper in eine aufrechte Position und positionieren Sie die Kopfstange leicht oberhalb und kaudal zu den Befestigungsstellen.
Als nächstes bereiten Sie den Zahnzement vor, indem Sie einen kleinen Löffel Polymer mit vier Tropfen schnellem Monomer und einem Tropfen Katalysator fünf mischen. Rühren Sie die Mischung gleichmäßig für 15 Sekunden. Unmittelbar nach dem Mischen wird der Zement mit einer Mikropipette und einer 10-Mikroliter-Pipettenspitze auf die Befestigungsstellen und den Bereich zwischen den Stellen aufgetragen.
Drücken Sie dann mit einem Mikromanipulator die Kopfstange vorsichtig auf den Zement. Bedecken Sie die Kopfstange mit dem restlichen Zement und warten Sie 12 Minuten, bis der Zement ausgehärtet ist. Um den optischen Zugang zum Vorderhirn für die Kalziumbildgebung zu verbessern, entfernen Sie mit einem Skalpell die Haut über dem Telencephalon.
Nach dem Aushärten den Ton von der Kopfleiste entfernen. Bereiten Sie als Nächstes ein Fischlademodul für den Mikromanipulator vor. Übertragen Sie dann die gesamte Kapsel von der Kanone auf den Pitch-Einsteller im Fischlademodul.
Positionieren Sie den Fisch mit dem Mikromanipulator so, dass die Kopfstange auf den Metallpfosten der Kopfstufe platziert ist. Erhöhen Sie den Neigungswinkel des Fisches leicht. Tragen Sie ultraviolett härtenden Kleber auf, um die Kopfstange an den Metallpfosten zu befestigen.
Ziehen Sie dann den Fisch aus der Kapsel und verriegeln Sie die Kopfstufe auf der Bodenplatte innerhalb des halbsechseckigen Tanks. Tauchen Sie das Tier nach der Operation in Aquarienwasser, um sich von der Narkose zu erholen.
