Beginnen Sie mit der Vorbereitung einer Biopsiestanze mit einem Durchmesser von 3,5 Millimetern. Markieren Sie einen Punkt auf dem Stempelschaft, der fünf Millimeter von der Kante entfernt ist. Befestigen Sie den Stempel und verwenden Sie ein Rotationswerkzeug mit zwei Geschwindigkeiten, um den markierten distalen Abschnitt des Schaftes zu durchtrennen.
Schneiden Sie den Schaft in einer Tiefe von 3,5 Millimetern ab, lassen Sie die letzten 1,5 Millimeter befestigt und biegen Sie die Spitze um 90 Grad. Als nächstes bereiten Sie PBS in 900 Milliliter destilliertem Wasser vor und stellen den pH-Wert auf 7,4 ein. Anschließend wird die Lösung durch Zugabe von destilliertem Wasser auf ein Endvolumen von einem Liter gebracht.
Bereiten Sie eine 4%ige Paraformaldehydlösung vor, indem Sie zwei Gramm Paraformaldehyd in 45 Millilitern PBS unter einer chemischen Haube auflösen und auf 65 Grad Celsius erhitzen, während Sie den pH-Wert auf 7,4 einstellen. Sobald der Paraformaldehyd vollständig aufgelöst ist, stellen Sie das Endvolumen der Lösung auf 50 Milliliter ein. Wiegen Sie die Maus, um das richtige Volumen des injizierbaren Anästhesiecocktails für die Verabreichung zu bestimmen.
Sobald die Anästhesie verabreicht wurde, positionieren Sie die Maus auf dem Operationstisch und halten Sie sich dabei an die Standardprinzipien der Nagetierchirurgie. Legen Sie dann ein fünf Millimeter hohes Kissen unter den Kopf des Nagers in der seitlichen Dekubitusposition. Trocknen Sie die Augenoberfläche gründlich mit einem chirurgischen Augenspeer ab und schneiden Sie die Wimpern ordentlich ab.
Stellen Sie das Operationsmikroskop für eine optimale Sicht auf die betäubte Maus ein und stellen Sie den Timer auf 30 Sekunden ein. Untersuchen Sie dann den Limbusumfang mit dem Operationsmikroskop, während Sie die Augenlider der Maus mit Daumen und Zeigefinger weit geöffnet halten. Halten Sie nun die sterilisierte Stanze Trepan vorsichtig parallel zur Augenachse, ohne Druck nach unten auszuüben.
Vermeiden Sie es, das Instrument zu drehen, und halten Sie die Achse des Stanztrepans parallel zur Globusachse. Bitten Sie den chirurgischen Assistenten, drei Tropfen Natronlauge in das Loch der Stanztrepane zu geben. Reinigen Sie nach 30 Sekunden die Hornhaut und Fornix mit fünf Millilitern PBS.
Verwenden Sie dann ein universelles pH-Indikatorpapier, um einen pH-Wert zwischen sieben und 7,5 auf der Hornhautoberfläche des verletzten Auges sicherzustellen. Nach dem Eingriff waschen, trocknen und desinfizieren Sie die Stanztrepanze und den Operationstisch mit 70%igem Ethanol. Untersuchen Sie die Augen einer betäubten Maus unter einem Spaltlampen-Biomikroskop und verwenden Sie eine Kamera, um Bilder aufzunehmen.
Tragen Sie dann 0,1 % fluoreszierende Augentropfen auf und tränken Sie überschüssige fluoreszierende Flüssigkeit mit einem Watteapplikator. Beurteilen Sie das mögliche Vorhandensein von Hornhautepitheldefekten mit dem Kobaltblaufilter und machen Sie Fotos. Tragen Sie anschließend die dreifach antibiotische Augensalbe auf die beschädigte Augenoberfläche auf.
Nukleieren Sie das Auge unter Erhalt des medialen Karunkels und der gesamten tastbaren Bindehaut. Sezieren Sie unter einem Operationsmikroskop vorsichtig die Verbindung zwischen dem Karunkel und der Haut. Ziehen Sie den Karunkel mit einer Zahnzange zurück und führen Sie die chirurgische Schere unter die tastbare Bindehaut in Richtung ihrer Verbindung mit der Tarsalplatte.
Schneiden Sie die Bindehaut entlang der Adhäsionslinie in Richtung des lateralen Kanthus. Drehen Sie dann die chirurgische Schere auf die Verbindung von Bindehaut und unterer Tarsalplatte in der subkonjunktivalen Ebene. Ziehen Sie nun die oberen und unteren Augenlider mit Daumen und Zeigefinger von der Nasenseite zurück.
Führen Sie beim Zurückziehen die Spitze der gebogenen Pinzette hinter die hervorstehende Tränendrüse und bewegen Sie sich in Richtung Sehnerv. Fassen Sie den Sehnerv fest und ziehen Sie die Kugel heraus. Spülen Sie den Globus später mit PBS ab und geben Sie ihn in die Fixierlösung.
Der Wundheilungsprozess des Mausauges nach Hornhaut- und Limbusalkaliverletzung in einem Mausmodell wird gezeigt. Das Hornhautödem ist an den Tagen null und zwei ausgeprägt, während die Fibrose in der zweiten Woche nach der Verletzung deutlicher ist. Der Epitheldefekt heilte durch Bindehautepithelzellwanderung in einem zentripetalen Muster in 12 bis 14 Tagen ab.
50 % der verletzten Augen entwickelten jedoch am Ende der zweiten Woche persistierende Epitheldefekte.
