Tauen Sie zunächst den RCAS(A)Retrovirus-Bestand auf Eis auf. Um ein Verstopfen der Mikropipette zu vermeiden, zentrifugieren Sie die Lösung bei 10.000 G für 10 Sekunden bei vier Grad Celsius und überführen Sie den Überstand in ein neues Röhrchen, während die Lösungen auf Eis bleiben. Legen Sie einen gestreckten Labor-Parafilm auf eine 35 x 10 Millimeter große Zellkulturschale und geben Sie einen Mikroliter steriles PBS in den Parafilm.
Schließen Sie eine vorbereitete Glasmikropipette an einen automatischen Pico-Injektor an. Drücken Sie den Füllmodus, um das PBS in eine Mikropipette zu füllen, und drücken Sie dann den Injektionsmodus, um den zugewiesenen Mikroliter Flüssigkeit zu testen. Legen Sie ein zweites Stück gestreckten Labor-Parafilm auf eine neue Zellkulturschale und geben Sie einen Mikroliter schnell grün gefärbten Virusmaterial in die Folie.
Senken Sie die Spitze der Mikropipette in den Virusvorrat und drücken Sie den Füllmodus, um die Mikropipette mit einem Mikroliter Virusmaterial zu füllen. Senken Sie unter einem Präpariermikroskop die gefüllte Mikropipette, die mit einem automatischen Injektor verbunden ist, in die Zielregion der Hühnerembryolinse. Stellen Sie dann die Lichtquelle so ein, dass eine klare Sicht auf das Linsenvesikel möglich ist.
Nachdem Sie sichergestellt haben, dass sich die Mikropipette an der richtigen Stelle im Linsenlumen befindet, injizieren Sie fünf bis 40 Nanoliter des Virusbestands. Warten Sie nach der Injektion 45 Sekunden, bevor Sie die Mikropipette vorsichtig entfernen. Überprüfen Sie als Nächstes die erfolgreiche Mikroinjektion, indem Sie den schnellen grünen Farbstoff im leeren Lumen der Linse ohne Leckage untersuchen.
Nach der Untersuchung die Eierschalenöffnung mit Tesafilm verschließen und die Eier in einen 37 Grad Celsius heißen, befeuchteten statischen Inkubator legen. Diese Studie demonstriert die histologische Bewertung der chimären Connexon 50 und 43 Loops durch Immunfluoreszenz. Mit Hilfe der Anti-Flag-Markierung wurden exogene Verbindungen von endogenen unterschieden.
Die Studie untersucht auch die Wechselwirkung zwischen der intrazellulären Schleifendomäne von connexon 50 und Aquaporin zero.
